乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)方法-熒光定量PCR法.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌是引起結(jié)核?。˙ovine tuberculosis）的重要人獸共患傳染病病原，一直困擾世界奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，危害著人類和動(dòng)物健康，給社會(huì)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將其列為B類動(dòng)物傳染病，我國將其列為二類動(dòng)物傳染病。全世界各國每年均花費(fèi)大量的人力、物力和財(cái)力去防制本病的發(fā)生。OIE指定的檢測(cè)方法是結(jié)核菌素試驗(yàn)方法，但該方法受物理、化學(xué)以及生物因素影響，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性、敏感性不高；經(jīng)典的細(xì)菌分離培養(yǎng)受到分枝桿

2、菌生長緩慢的影響，檢測(cè)周期長。對(duì)于出入境檢驗(yàn)檢疫，乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌的快速檢測(cè)方法的建立又顯得尤為重要。因此建立快速、靈敏、特異的檢測(cè)乳及乳制品中結(jié)核分枝桿菌方法對(duì)于出入境檢驗(yàn)檢疫及本病的防控具有重要意義。
　　本研究根據(jù)結(jié)核分支桿菌保守序列設(shè)計(jì)特異引物，建立了結(jié)核分枝桿菌的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)法。對(duì)該方法的靈敏度、特異性和重復(fù)性進(jìn)行研究，結(jié)果表明：所建立的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為

3、y=-3.29x+38.6，相關(guān)系數(shù)為0.9980；敏感性高，可達(dá)1×102 copies/μL，亦可達(dá)10 CFU/5mL?？垢蓴_能力強(qiáng)，僅結(jié)核分枝桿菌出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線。重復(fù)性良好，分別用不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒進(jìn)行組內(nèi)和組間平行試驗(yàn)，結(jié)果顯示批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均小于1％。經(jīng)大連動(dòng)物疾病預(yù)防控制中心、吉林出入境檢驗(yàn)檢疫局、河南出入境檢驗(yàn)檢疫局、山東出入境檢驗(yàn)檢疫局、黑龍江出入境檢驗(yàn)檢疫局等5家單位驗(yàn)證，表明該實(shí)時(shí)熒光定量 PCR方法能準(zhǔn)