Fibrillin轉(zhuǎn)入甘藍型油菜中的研究.pdf

1、Fibrillin是一類由核基因編碼，與質(zhì)體相關的脂連接蛋白，廣泛存在于單子葉和雙子葉植物中。在逆境條件下，如強光、寒冷和干旱環(huán)境，該類蛋白大量積累，說明Fibrillin在生物脅迫下發(fā)揮重要功能。在擬南芥中已發(fā)現(xiàn)Fibrillin是ABl2(ABA insensitive)相互作用蛋白質(zhì)，其合成也依賴于ABll，而ABll和ABl2是脫落酸(ABA)信號傳導過程中的關鍵因子，推測Fibrillin作為負調(diào)控因子，參與到ABA信號傳導途

2、徑。同時Fibrillin與油質(zhì)體相關，強光下對光合系統(tǒng)Ⅱ有保護作用，則該基因在油菜中的過量表達可能有利于提高油菜的抗逆能力和產(chǎn)油量。因此研究Fibrillin在油菜中的表達具有重要的理論意義和實踐意義。 在本實驗中，將擬南芥Fibrillin操縱子連接到帶有熒光素酶(LUC)報告基因的pBI22l質(zhì)粒上，通過聚乙二醇(PEG)導入甘藍型油菜蜀雜9號原生質(zhì)體中進行瞬時表達，檢測報告基因熒光素酶的表達量，初步得到油菜原生質(zhì)體表達系

3、統(tǒng)。加入一定量的脫落酸(ABA)后，發(fā)現(xiàn)報告基因的表達量有上升趨勢，說明ABA能誘導報告基因的表達，擬南芥Fibrillin操縱子在甘藍型油菜原生質(zhì)體中對ABA的誘導敏感。 為了進一步驗證Fibrillin與ABA之間的關系，把Fibrillin操縱子和Fibrillin cDNA分別連接到帶有葡萄糖昔酶(GUS)報告基因的pBIl21質(zhì)粒上，經(jīng)農(nóng)桿菌浸染甘藍型油菜84100-18的下胚軸，以期獲得穩(wěn)定表達的轉(zhuǎn)基因植株。我們根據(jù)

4、材料特點，優(yōu)化了預培養(yǎng)、農(nóng)桿菌浸染、共培養(yǎng)、誘導愈傷、誘導芽、生根等組織培養(yǎng)的各個步驟，最終經(jīng)卡那霉素篩選獲得了油菜抗性苗。通過PCR驗證，初步證明得到了含外源Fibrillin cDNA的轉(zhuǎn)基因植株，沒有得到含F(xiàn)ibrillin操縱子的轉(zhuǎn)基因植株。對于含外源Fibrillin cDNA的轉(zhuǎn)基因植株，我們將對其進行功能鑒定，如通過基因在植株中的過量表達，檢測其在光合作用中所起的作用。針對Fibrillin啟動子，我們將繼續(xù)優(yōu)化條件，以期