Lazaroid(U-83836E)對早期糖尿病視網(wǎng)膜病變保護機制的研究.pdf

1、近年來，隨著人民生活水平的提高，我國糖尿病的發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，伴隨而來糖尿病視網(wǎng)膜病變（Diabetic Retinopathy，DR）的發(fā)生率亦每年增加，導(dǎo)致因此而失明致盲的人數(shù)呈幾何上升。由于發(fā)病機制不明確，其治療也受到一定限制。目前國內(nèi)外的研究已經(jīng)明確活性氧(Reactive oxygen species,ROS)導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化物化在DR的發(fā)生和發(fā)展過程中起著非常重要的作用，因此如何有效地減少脂質(zhì)過氧化物化已成為治療DR的

2、關(guān)鍵。 目的： 本研究旨在通過觀察早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜功能的變化、視網(wǎng)膜在透射電鏡下形態(tài)學(xué)的改變，檢測視網(wǎng)膜組織的抗氧化機能，并且用抗脂質(zhì)過氧化藥物L(fēng)azaroid進行干預(yù)，首次在國內(nèi)外闡明Lazaroid是否對糖尿病所致的脂質(zhì)過氧化物化具有明確的保護作用，且是通過何種途徑實現(xiàn)的，進而為拓展DR的治療提供一嶄新和有效的途徑。 實驗一 抗脂質(zhì)過氧化藥物L(fēng)azaroid(U-83836E)對早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜電流圖

3、變化的影響 材料和方法： 采用1％鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）按照60mg/ kg的劑量，在Sprague-Dawley（SD）大鼠腹腔內(nèi)注射，建立糖尿病動物模型，成模3周后通過尾靜脈注射Lazaroid進行干預(yù)，隔日一次共10天。各Lazaroid干預(yù)組、糖尿病不給藥組、以及對照組分別于實驗前后進行視網(wǎng)膜電流圖（Electroretinogram，ERG）檢查，記錄暗適應(yīng)最大電反應(yīng)的a波與b波振幅

4、及振蕩電位（Oscillatory Potentials，Ops）振幅總和。配對t檢驗作統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 尾靜脈注射Lazaroid組以及對照組在實驗前后的暗適應(yīng)最大電反應(yīng)ｂ波、Ops振幅值差別無統(tǒng)計意義（P>0.05）。糖尿病不給藥組實驗前后的暗適應(yīng)最大電反應(yīng)ｂ波、Ops振幅值差別有統(tǒng)計意義（P<0.05）。各組實驗前后的暗適應(yīng)最大電反應(yīng)ａ波振幅值差別無統(tǒng)計意義。 結(jié)論： 糖尿病動物模型在建立的早期已

5、經(jīng)出現(xiàn)視覺電生理的變化，對早期糖尿病大鼠模型全身使用Lazaroid對視網(wǎng)膜神經(jīng)元確有保護作用。 實驗二 早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜和Lazaroid影響下糖尿病大鼠視網(wǎng)膜透射電鏡形態(tài)學(xué)觀察 材料和方法： 采用STZ誘導(dǎo)SD大鼠建立糖尿病動物模型，成模3周后通過尾靜脈注射Lazaroid進行干預(yù)，隔日一次共10天。各Lazaroid干預(yù)組、糖尿病不給藥組、以及對照組大鼠，其視網(wǎng)膜經(jīng)固定、脫水、浸透和包埋后，對組織切片進

6、行透射電子顯微鏡觀察、攝片。 結(jié)果： 4周后，STZ誘導(dǎo)的糖尿病SD大鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞內(nèi)出現(xiàn)線粒體的改變，同期使用Lazaroid干預(yù)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜未出現(xiàn)明顯的空泡變性，神經(jīng)節(jié)細胞形態(tài)基本正常。 結(jié)論： 在早期糖尿病動物模型的視網(wǎng)膜中，發(fā)現(xiàn)神經(jīng)節(jié)細胞超微結(jié)構(gòu)的改變，全身使用Lazaroid對視網(wǎng)膜神經(jīng)元確有保護作用。 實驗三Lazaroid對早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)3-NT和iNOS的影響

7、 材料和方法： 采用STZ誘導(dǎo)SD大鼠建立糖尿病動物模型，成模3周后通過尾靜脈注射Lazaroid進行干預(yù)，隔日一次共10天。各Lazaroid干預(yù)組、糖尿病不給藥組、以及對照組大鼠眼球石蠟包埋后連續(xù)組織切片，Envision+TM二步法行3－硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine ，3-NT)和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）的免疫組織化學(xué)染色，光鏡下觀察

8、它們在視網(wǎng)膜各層的表達。 結(jié)果： 一、3-NT免疫組化染色正常大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)3-NT 陽性細胞為陰性，STZ誘導(dǎo)4周后的糖尿病SD大鼠視網(wǎng)膜中3-NT 表達呈強陽性，主要集中于神經(jīng)節(jié)細胞。Lazaroid干預(yù)組3-NT 表達呈弱陽性，散在分布于神經(jīng)節(jié)細胞。 二、iNOS免疫組化染色 對照組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)幾乎沒有iNOS陽性細胞，糖尿病不用藥組視網(wǎng)膜中iNOS 表達呈強陽性，主要集中于神經(jīng)節(jié)細胞。Lazaroi

9、d干預(yù)組iNOS 表達呈弱陽性，散在分布于神經(jīng)節(jié)細胞。 結(jié)論： 早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜的損傷程度與過量NO生成有關(guān)，氧化損傷在DR發(fā)生發(fā)展中起重要作用。Lazaroid能降低早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜3-NT、iNOS的表達水平，從而發(fā)揮對DR所致的脂質(zhì)過氧化物化的保護作用。 實驗四Lazaroid對早期糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)脂過氧化物酶(malondialdehyde，MDA)和岐過氧化物酶(superoxide dism

10、utase，SOD)水平的影響 材料和方法： 采用化學(xué)比色法及羥氨法測定各Lazaroid干預(yù)組、糖尿病不給藥組、以及對照組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)脂過氧化物酶(MDA)和岐過氧化物酶(SOD)水平，并用配對t檢驗方法進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 糖尿病大鼠機體抗氧化機能明顯降低，血清脂質(zhì)過氧化終末產(chǎn)物MDA含量顯著增高，抗氧化酶SOD活性減弱，與正常組比較有顯著性差異（P<0.05）。Lazaroid能明顯降低糖尿病大鼠

11、視網(wǎng)膜內(nèi)MDA含量，顯著提高SOD活性，Lazaroid干預(yù)組與糖尿病組視網(wǎng)膜內(nèi)MDA和SOD比較差異有顯著性（P<0.05）。 結(jié)論： 糖尿病大鼠機體抗氧化機能明顯降低，視網(wǎng)膜受到氧化損傷。Lazaroid能降低DM大鼠脂質(zhì)過氧化損傷，增強視網(wǎng)膜抗氧化能力。 實驗五 靜脈注射Lazaroid(U-83836E)后玻璃體視網(wǎng)膜內(nèi)藥物的檢測 材料和方法： 用高效液相色譜方法對靜脈注射U-83836

12、E后糖尿病大鼠玻璃體視網(wǎng)膜內(nèi)藥物濃度進行檢測。 結(jié)果： 用藥組色譜圖顯示與U-83836E標準品溶液的出峰時間相同。U-83836E的保留時間為5.20min。 結(jié)論： 尾靜脈注射Lazaroid(U-83836E）后的糖尿病大鼠，藥物能到達其玻璃體視網(wǎng)膜界面而發(fā)揮對DR的治療作用。 綜上所述，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜組織抗氧化機能處于明顯低下狀態(tài)，氧化損傷在DR發(fā)生發(fā)展中起重要作用?？怪|(zhì)過氧化物L(fēng)az