miR-215和miR-218在急性髓系白血病中的表達(dá)及其臨床意義的研究.pdf

1、目的：
　　本研究擬通過實(shí)時(shí)定量PCR(RQ-PCR)的方法，對(duì)急性髓系白血病(acutemyeloid leukemia，AML)患者骨髓中的微小RNA-215(microRNA-215，miR-215)和微小RNA-218(microRNA-218，miR-218)的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，并通過分析miR-215和miR-218在AML患者和正常人骨髓單個(gè)核細(xì)胞中表達(dá)情況的差異對(duì)其臨床意義進(jìn)行探討。
　　方法：
　　1

2、、研究對(duì)象:miR-215的檢測(cè)中共收集70例AML患者骨髓標(biāo)本，對(duì)照組為16例正常人骨髓標(biāo)本。miR-218的檢測(cè)中共收集71例AML患者骨髓標(biāo)本，對(duì)照組為14例正常人骨髓標(biāo)本。
　　2、設(shè)計(jì)與合成引物:參照相關(guān)文獻(xiàn)，采用Premier Primer5軟件進(jìn)行miR-215和miR-218及內(nèi)參U6基因的引物設(shè)計(jì)。
　　3、對(duì)各研究對(duì)象的骨髓單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行分離，并對(duì)細(xì)胞中的總RNA進(jìn)行提取，然后經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄過程將cDNA合成，

3、進(jìn)行RQ-PCR，對(duì)miR-215和miR-218的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)得到Ct值，分析測(cè)定△Ct值?！鰿t值=目的基因Ct值-內(nèi)參基因Ct值。
　　4、分別對(duì)miR-215和miR-218的測(cè)定結(jié)果與患者臨床資料進(jìn)行分析。
　　5、對(duì)所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1、總RNA純度分析:通過紫外分光光度計(jì)對(duì)所提取的總RNA進(jìn)行分析檢測(cè)，結(jié)果顯示大部分OD260/280的比值分布在1.8-2.2之間

4、，純度較高。
　　2、U6內(nèi)參基因和目的基因經(jīng)擴(kuò)增后生成熔解曲線，曲線呈單一、銳利的峰表明擴(kuò)增產(chǎn)物沒有產(chǎn)生明顯的引物二聚體，沒有出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象，產(chǎn)物較均一。用2％濃度的瓊脂糖凝膠對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析，觀察擴(kuò)增片段呈單一條帶，說明沒有非特異性擴(kuò)增出現(xiàn)和引物二聚體產(chǎn)生。
　　3、AML患者中miR-215和miR-218的表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)。
　　4、AML患者中miR-21

5、5表達(dá)與患者的年齡、性別、血紅蛋白含量、PLT計(jì)數(shù)、FAB分組和核型分析之間無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)，但與白細(xì)胞計(jì)數(shù)有關(guān)，低表達(dá)組的WBC計(jì)數(shù)明顯高于高表達(dá)組(P＜0.05); miR-215低表達(dá)組患者的NPM1基因突變率高于高表達(dá)組患者(P=0.008)，其余9種基因突變無(wú)相關(guān)性。
　　5、AML患者中miR-218表達(dá)與患者的年齡、性別、WBC、Hb含量、PLT計(jì)數(shù)、FAB分組和核型分析、10種基因突變之間無(wú)相關(guān)性(P＞0.