楊梅素在大鼠尿液中代謝產(chǎn)物的分析及其排泄情況研究.pdf

1、目的:建立楊梅素經(jīng)大鼠口服給藥后在大鼠尿液中代謝產(chǎn)物的LC-MS檢測方法，并對其代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)進行分析;建立楊梅素經(jīng)大鼠口服給藥后在尿液及糞便中楊梅素的含量測定方法，并應(yīng)用于楊梅素大鼠體內(nèi)排泄情況的研究;通過以上研究，為楊梅素的安全有效用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:(1)楊梅素大鼠體內(nèi)代謝物測定采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS/MS)法，色譜條件:色譜柱:WatersSymmetryC18色譜柱(5μm，250mm×4.

2、6mm);流動相:乙腈:0.1％磷酸，梯度洗脫;流速:1mL/min;檢測器:紫外檢測器（檢測波長為375nm）;柱溫:30℃;進樣量:20μL;分析時間:35min。質(zhì)譜條件:ESI源，噴霧電壓:4KV;溫度:350℃;掃描方式:負離子掃描;掃描范圍:100-2000m/z。鞘氣(He):1.2L/min;輔助氣(N2):6L/min;毛細管電壓:5V;管透鏡補償電壓:-5V;采用二級全掃描質(zhì)譜(FullScanMS2)。相對碰撞能:

3、30％。根據(jù)各代謝產(chǎn)物的質(zhì)譜檢測結(jié)果及有關(guān)文獻的記載，分析楊梅素的代謝物質(zhì)，確定各代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。(2)采用反相高效液相色譜法測定了楊梅素經(jīng)大鼠灌胃給藥后48小時內(nèi)不同時間段尿液中楊梅素原型藥物的含量。色譜條件:色譜柱:WatersSymmetryC18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm);柱溫:30℃;流動相:乙腈:0.1％磷酸，梯度洗脫;流速:1mL/min;檢測器:紫外檢測器（檢測波長為375nm）;進樣量:20“L;分析時間

4、:25min。(3)采用反相高效液相色譜法測定了楊梅素經(jīng)大鼠灌胃給藥后不同時間段在其糞便中楊梅素原型藥物的含量。色譜條件:色譜柱:WatersSymmetryC18色譜柱(5μm，250mm×4.6mm);柱溫:30℃;流動相:乙腈:1％冰乙酸，等度洗脫;流速:1mL/min;檢測器:紫外檢測器（檢測波長為375nm）;進樣量:20μL;分析時間:15min。
　　 結(jié)果:(1)建立的高效液相-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測出楊梅素經(jīng)大鼠灌胃給

5、藥后在其尿液中共有12個代謝產(chǎn)物，其中已確定結(jié)構(gòu)的代謝產(chǎn)物7個，分別為黃酮類化合物常見的代謝產(chǎn)物如裂環(huán)產(chǎn)物3，5二羥基苯甲醛，楊梅素一甲基化產(chǎn)物和楊梅素二甲基化產(chǎn)物，脫羥基代謝產(chǎn)物等。(2)本研究建立的大鼠尿液中楊梅素原型藥物的RP-HPLC含量測定方法，結(jié)果顯示在大鼠尿液中，楊梅素在0.175～3.500μg/mL濃度范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系(r=0.998)。低、中、高濃度平均回收率分別為103.43％、109.86％、100.29％

6、，RSD分別為5.77％、9.17％和5.85％。(3)本文建立的大鼠糞便中楊梅素原型藥物的含量測定方法，結(jié)果表明楊梅素在0.20-10.00mg/g濃度范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系(r=0.999);低、中、高濃度平均回收率分別為90.77％、81.58％、93.09％，RSD分別為2.20％、2.28％、2.36％。
　　 結(jié)論:本研究建立的楊梅素在大鼠尿液中代謝物質(zhì)的LC-MS檢測方法，可較好地對其代謝物質(zhì)的結(jié)構(gòu)進行分析，鑒定得

7、到大鼠尿液中楊梅素的代謝物質(zhì)主要有裂環(huán)產(chǎn)物如3，5二羥基苯甲醛，3，4-二羥基-5-甲氧基苯乙酸;楊梅素一甲基化產(chǎn)物和楊梅素二甲基化產(chǎn)物，脫羥基代謝產(chǎn)物。所建立的楊梅素在大鼠尿液及糞便的排泄物中楊梅素原型藥物的含量測定方法，具有較強的針對性和準(zhǔn)確性，可用于分析和監(jiān)控楊梅素在大鼠體內(nèi)的排泄情況。通過對楊梅素經(jīng)大鼠灌胃給藥后在不同時間段楊梅素原型藥物在尿液及糞便中的含量測定結(jié)果進行分析，可見楊梅素在大鼠6-12小時尿液中含量最高，36-48