舌鱗狀細胞癌中血管生成擬態(tài)的臨床意義.pdf

1、背景：口腔頜面部惡性腫瘤約占全身惡性腫瘤的0.94％，其中最常見的是鱗狀細胞癌，約占口腔頜面部惡性腫瘤80％以上，舌鱗狀細胞癌在我國口腔頜面部惡性腫瘤中的發(fā)病率約為32.3％。舌鱗狀細胞癌多發(fā)生于舌前靈活活動部位，發(fā)生于舌中1/3邊緣部的占50％以上，其次為舌根、舌背、舌底及舌尖部。致病因素包括飲酒、吸煙、尖銳的殘根殘冠長期機械性損傷和人類乳頭瘤狀病毒感染等等。由于舌的機械運動頻繁以及口腔頜面部的淋巴及血運相對豐富的生理特點，舌鱗狀細胞

2、癌易通過淋巴和血液循環(huán)通路全身轉(zhuǎn)移，在腫瘤早期即可發(fā)生轉(zhuǎn)移。臨床對舌鱗狀細胞癌的治療主要以手術(shù)切除腫瘤組織為主，放射治療及化學(xué)藥物治療為輔的綜合治療手段，希望可以較大幅度地提高治愈率，改善患者的生活質(zhì)量，但治愈率僅為10％-45％。近年來，抗血管生成治療逐漸成為抗腫瘤治療的另一種方法。腫瘤生長、轉(zhuǎn)移均依賴新生血管的形成，而且腫瘤誘導(dǎo)血管生成的能力與其侵襲能力相關(guān)。在腫瘤發(fā)生的早期，腫瘤細胞主要通過組織滲透而維持其生長，但當腫瘤直徑超過1

3、-2cm后，腫瘤必須形成能供給自身營養(yǎng)的新生血管。既往廣泛認可的腫瘤血管新生途徑是內(nèi)皮依賴性新生血管途徑。抗血管生成治療，或稱之為腫瘤血管治療，是與傳統(tǒng)化療完全不同的腫瘤藥物治療，其藥物作用的對象不是腫瘤細胞本身，而是在分子水平通過抑制或破壞腫瘤血管生成控制腫瘤生長，從而達到抗腫瘤治療的目的。抗血管生成治療主要有兩種方式，一是阻止腫瘤生長所需的新生血管形成，二是破壞腫瘤組織中已存在的腫瘤血管。理論上，抗血管生成治療理應(yīng)具有良好的治療效果

4、，然而，臨床研究卻顯示抗內(nèi)皮細胞治療腫瘤療效并不令人滿意。這可能與腫瘤除腫瘤血管生成途徑以外，還可以其他途徑獲得血液供應(yīng)有關(guān)。血管生成擬態(tài)(Vasculogenic Mimicry VM)是近年來提出的一個腫瘤微循環(huán)的全新概念。與經(jīng)典腫瘤血管生成途徑不同的，VM是不依賴血管內(nèi)皮細胞的微循環(huán)模式，腫瘤細胞圍成管道，管道內(nèi)由PAS染色陽性的細胞基質(zhì)膜包繞，形態(tài)上呈多樣性并連接呈網(wǎng)絡(luò)，部分管腔內(nèi)見紅細胞，經(jīng)血管造影顯示有血流通過，證實為血管樣

5、結(jié)構(gòu)，并經(jīng)過光鏡，透射電鏡及血管內(nèi)皮細胞標志物的免疫組化檢測，均沒有發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細胞的存在。這種為腫瘤供血的不同于傳統(tǒng)血管生成的血管樣結(jié)構(gòu)，稱為VM。VM的特點是:管腔內(nèi)沒有血管內(nèi)皮細胞，腫瘤細胞模仿機體血管生成并通過自身變形和厚薄不一的PAS染色陽性的細胞基質(zhì)膜形成管道，血液在這種管道中流動。國內(nèi)外學(xué)者普遍認為具有VM的腫瘤有惡性度高，生長迅速，轉(zhuǎn)移率高，易發(fā)生血道轉(zhuǎn)移，可能與血管無內(nèi)皮細胞襯覆，腫瘤直接與血液接觸有關(guān)。VM的提出對以

6、內(nèi)皮依賴性血管是腫瘤微循環(huán)唯一方式的傳統(tǒng)觀念提出了挑戰(zhàn)，同時也是對腫瘤血管生成理論的重要補充。與經(jīng)典的血管生成途徑完全不同，VM是高侵襲性腫瘤為了滿足自身的血液供應(yīng)，通過自身表型和細胞外基質(zhì)重塑而圍成的一種類血管樣的管道，是不依賴血管內(nèi)皮細胞的一種腫瘤微循環(huán)模式。VM的發(fā)現(xiàn)解釋了以抑制腫瘤血管生成為主要作用靶點的抗腫瘤治療效果不佳的原因。自VM發(fā)現(xiàn)以來，人們開始認識到內(nèi)皮細胞依賴的腫瘤血管生成并不是腫瘤唯一的微循環(huán)模式，在抑制腫瘤微循環(huán)

7、的治療中兼顧VM與血管生成，尤其重視VM的治療才能獲得良好療效。人們認為VM的存在與腫瘤的生長、分化程度、侵襲性等密切相關(guān)，具有VM的腫瘤預(yù)后更差。有學(xué)者提出抗血管生成治療和抗血管生成擬態(tài)形成聯(lián)合應(yīng)用從而抑制腫瘤生長的設(shè)想。因為舌的機械運動頻繁及淋巴血運豐富，舌鱗狀細胞癌患者易發(fā)生早期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等特點，而VM存在的腫瘤也有易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移的特點。那么，專門針對舌鱗狀細胞癌中VM的研究則對臨床上舌鱗狀細胞癌的治療及評估預(yù)后具有針對性的意義，

8、而國內(nèi)外研究尚未見報道。因此研究VM在舌鱗狀細胞癌患者侵襲轉(zhuǎn)移過程中的關(guān)系，評估其臨床和預(yù)后價值，對于作為未來控制舌癌術(shù)后侵襲轉(zhuǎn)移的有效的治療有非常重要的意義。
　　 目的：通過采集本院臨床資料完整、標本組織蠟塊完好的舌鱗狀細胞癌患者的石蠟病理標本，切片后進行HE染色及免疫組化染色，通過光學(xué)顯微鏡鏡下觀察了解在舌癌患者中是否存在VM并采集數(shù)據(jù)，分為VM陽性組和VM陰性組兩組，結(jié)合患者年齡、性別、淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度等臨床資

9、料，通過統(tǒng)計學(xué)方法分析兩組與患者年齡、性別、淋巴轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度的關(guān)系，為指導(dǎo)舌鱗狀細胞癌患者的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：⑴收集南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院2003年-2011年間手術(shù)切除的42例臨床資料齊全、標本組織蠟塊完好的舌鱗狀細胞癌患者病理標本，年齡40-81(61.2±9.8)歲;男31例，女11例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:已發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者14例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者28例。組織學(xué)分級:高分化者20例，中分化者16例，低分化者

10、6例。全部病例經(jīng)術(shù)后病理證實為舌鱗狀細胞癌，并且有完整的臨床資料和病理資料，全部病例經(jīng)過隨訪，方式包括門診隨訪，住院復(fù)查，電話隨訪。⑵應(yīng)用鼠抗人單克隆抗體CD34（克隆號:QBEnd/10，Leica，7ml工作液）;即用型快捷免疫組化MaxVisionTM檢測試劑盒（KIT-5030，110 ml，福州邁新生物技術(shù)有限公司）;PAS染色試劑盒（BA4080A，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。⑶將從南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院2003年-2011年

11、問手術(shù)切除的42例臨床資料齊全、標本組織蠟塊完好的舌鱗狀細胞癌患者病理標本，進行HE染色及CD34免疫組化染色結(jié)合過碘酸雪夫氏(Periodic acid Schiff，PAS)雙重染色檢測舌鱗狀細胞癌中的VM。⑷采用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件，頻數(shù)資料采用四格表資料X2檢驗，和兩獨立樣本非參數(shù)檢驗（秩和檢驗），分析兩變量間的相關(guān)關(guān)系，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。將采集研究數(shù)據(jù)分為VM陽性組和VM陰性組兩組，采用SPSS13.0統(tǒng)計分析

12、軟件，采用四格表資料X2檢驗，和兩獨立樣本非參數(shù)檢驗（秩和檢驗），分析舌癌患者中Ⅷ與患者年齡、性別、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤組織分化程度的關(guān)系。
　　 結(jié)果：①經(jīng)HE染色和CD34/PAS雙重染色，在本實驗42例舌鱗狀細胞癌患者病理標本中，發(fā)現(xiàn)存在VM的比例為42.86％(18/42)。HE染色可見腫瘤細胞沿管道壁排列，圍成管道狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)見紅細胞。CD34/PAS雙重染色見腫瘤細胞圍成管道，管道內(nèi)由PAS染色陽性的細胞基質(zhì)膜包繞，管腔內(nèi)

13、見紅細胞，這種管道狀結(jié)構(gòu)CD34染色呈陰性，證明其不是內(nèi)皮細胞。VM管道結(jié)構(gòu)圍繞的細胞異型性明顯，胞質(zhì)豐富，呈顆粒狀，核深染，核大呈結(jié)節(jié)狀、分葉狀等多種形態(tài)，核膜厚，核膜出現(xiàn)凹陷、皺褶，核膜呈鋸齒狀，染色質(zhì)邊移，核仁明顯，出現(xiàn)巨大核仁，異常核分裂，核質(zhì)比例增大，證實為癌細胞。②發(fā)現(xiàn)18例舌鱗狀細胞癌患者病理標本中檢測到VM，其中4例為高分化，9例為中分化，5例為低分化。是否存在VM與患者年齡、性別分別進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義;VM陽性

14、組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為50.00％，VM陰性組患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為20.83％，經(jīng)X2檢驗，P=0.049，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可認為兩組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率不同，Ⅷ陽性組舌鱗狀細胞癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高于Ⅷ陰性組;是否存在VM與患者腫瘤組織分化程度進行比較，用Wilcoxon秩和檢驗，p=0.002，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，可認為兩組腫瘤組織分化程度不同，VM陽性組舌鱗狀細胞癌患者腫瘤組織分化程度低于VM陰性組。
　　 結(jié)論：⑴CD34和PAS雙重