熒蒽和萘暴露對哮喘小鼠速發(fā)相反應的作用及其機制的研究.pdf

1、目的：探討不同濃度的熒蒽和萘暴露對哮喘小鼠速發(fā)相反應的作用及其機制。
　　方法：選擇雄性小鼠120只(Balb/c)，隨機分組為12組，10只/組；哮喘模型組（C組），利用新鮮配置卵清白蛋白（OVA）20ug+氫氧化鋁2mg共0.2ml于第1，8，15天給予小鼠腹腔注射致敏，第22天開始給予3％卵清白蛋白（OVA）+生理鹽水溶液霧化吸入，1次/天，30min/d，連續(xù)霧化吸入7天。正常對照組（A組），以生理鹽水代替卵清白蛋白分別進

2、行腹腔注射和霧化吸入。酒精對照組（B組），以95%乙醇溶液代替卵清白蛋白，步驟同A組。D組為熒蒽低濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽低濃度（50ug/m3）；E組為熒蒽中濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽中濃度（100ug/m3）；F組為熒蒽高濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽高濃度（200ug/m3）；G組為萘低濃度組，在制備哮喘模型前暴露于萘低濃度（50mg/m3）；H組為萘中濃度組，在制備哮喘模型前暴露于萘中濃度（250mg/m3

3、）；I組為萘高濃度組，在制備哮喘模型前暴露于萘高濃度（500 mg/m3）；J組為混合低濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽+萘低濃度（熒蒽50ug/m3+萘50mg/m3）；K組為混合中濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽+萘中濃度（熒蒽100ug/m3+萘250mg/m3）；L組為混合高濃度組，在制備哮喘模型前暴露于熒蒽+萘高濃度（熒蒽200ug/m3+萘500mg/m3）。暴露染毒時在玻璃熏氣箱中進行動式染毒，4小時/日，連續(xù)2周。同

4、時A，B，C組也在同樣大小的玻璃箱中接受新鮮空氣，4小時/日，連續(xù)2周。D、E、F、G、H、I、J、K、L組暴露染毒后，再以卵清白蛋白致敏為哮喘模型。各組攻擊結(jié)束一周后，再給予3%卵清白蛋白激發(fā)氣道30分鐘，并利用多道信號采集處理系統(tǒng)測定氣道阻力；計數(shù)肺泡灌洗液中嗜酸性粒細胞數(shù)；采用免疫組化方法檢測肺組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）陽性表達；并觀察肺組織病理學

5、形態(tài)的變化。
　　結(jié)果：①A、B組的小鼠吸入組胺（MCH）后氣道阻力比值相似，無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。C-L組小鼠氣道阻力比值均高于A、B組，與A、B組比較差異C-L組均有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。與C組相比較，D-L組小鼠氣道阻力比值均有所升高，但僅有E、F、H、I、K、L組與C組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。②支氣管肺泡灌洗液中A、B組未見或見少量的嗜酸性粒細胞（EOS），A組與B組比較無統(tǒng)計學意義（P>0.0

6、5）。C-L組支氣管肺泡灌洗液中EOS數(shù)占細胞總數(shù)的百分比明顯高于A組及B組，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。D-L組中EOS數(shù)占細胞總數(shù)的百分比有所升高，且隨吸入的熒蒽和萘濃度的增加，嗜酸性粒細胞數(shù)也逐漸增多，但與C組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。③A、B組肺組織中的血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1（TIMP-1）的陽性表達相似，無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。A組及

7、B組小鼠血管內(nèi)皮細胞未見明顯VEGF、MMP-9、TIMP-1表達；D-L組小鼠VEGF、MMP-9、TIMP-1在肺組織細胞漿內(nèi)見不同程度的陽性表達，可見胞核著色，與A組及B組比較有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。VEGF混合高濃度組（L組）及MMP-9混合高濃度組（L組）比哮喘模型組（C組）陽性表達明顯，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；TIMP-1混合高濃度組（L組）比哮喘模型組（C組）陽性表達明顯，比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.

8、05）。D-L組陽性表達比哮喘模型組（C組）不同程度增高，但混合中、低濃度組，以及熒蒽和萘的高、中、低濃度組陽性表達與哮喘模型組比較無統(tǒng)計學意義（P>0.05）?；旌细邼舛冉MMMP-9與TIMP-1的比值明顯升高，MMP-9與VEGF呈正相關(guān)。④A、B組肺組織病理切片中可以看到支氣管上皮細胞完整，無變性、壞死，間質(zhì)內(nèi)未見炎癥細胞的浸潤，血管周圍未見水腫等改變。C組可見氣道周圍較多炎癥細胞浸潤。D、G、J組見部分氣道周圍有大量炎性細胞浸潤