CpG-ODN不同給藥途徑對哮喘小鼠炎癥反應的影響及其機制探討.pdf

1、[目的]
　　 本實驗研究CpG不同給藥途徑對哮喘小鼠肺泡灌洗液及外周血IFN-γ、IL-4細胞因子及氣道組織病理改變的影響，同時檢測NF-κB在肺組織內(nèi)的表達情況，探討CpG治療哮喘的機制及其安全性。
　　 [方法]
　　 40只BALB/c小鼠隨機分5組：A組為正常對照組，以PBS致敏激發(fā)；B組為哮喘組，以OVA致敏激發(fā)；C組為地塞米松組，OVA致敏激發(fā)并于激發(fā)前腹腔內(nèi)注射地塞米松；D組為CpG腹腔注射組，O

2、VA致敏激發(fā)并腹腔注射CpG；E組為CpG滴鼻組，OVA致敏激發(fā)并鼻腔滴入CpG。最后1次激發(fā)后24h內(nèi)處死動物并收集標本。計數(shù)肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid，BALF)中的白細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞(Eosinophil，EOS)數(shù)；用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測BALF和血清中白細胞介素-4(Interleukin-4，IL

3、-4)及干擾素-γ(Interferon gamma，IFN-γ)肺組織病理標本行蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosine，HE)染色觀察小鼠肺組織病理形態(tài)學改變，用免疫組織化學(Immunohistochemistry，IH)法檢測小鼠肺組織中NF-κB表達水平。所得數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0進行統(tǒng)計分析。
　　 [結果]
　　 1小鼠反應性觀察對照組小鼠無明顯呼吸急促表現(xiàn)，行動活潑。哮喘組經(jīng)OVA激

4、發(fā)后出現(xiàn)呼吸急促，煩躁不安，連續(xù)激發(fā)三天后，皮毛粗糙，活動能力下降。地塞米松組及腹腔注射CpG組癥狀較哮喘組輕。CpG滴鼻組較哮喘組出現(xiàn)更加明顯的呼吸短促，皮毛粗糙，活動能力嚴重下降，對刺激反應遲鈍，進食量少等表現(xiàn)。
　　 2小鼠BALF中細胞學改變哮喘組BALF中白細胞總數(shù)及Eos計數(shù)均較正常對照組有明顯增加(P<0.05)。經(jīng)過地塞米松或CpG腹腔腹腔注射處理后，白細胞總數(shù)及Eos計數(shù)均較哮喘組減少(P<0.05)。CpG滴

5、鼻組肺泡灌洗液出現(xiàn)大量紅細胞滲出，使用嗜酸球細胞計數(shù)液處理后行Eos計數(shù)，計數(shù)結果比哮喘組明顯降低(P<0.05)。
　　 3小鼠BALF中IL-4及INF-γ表達水平變化哮喘組BALF中炎癥因子IL-4水平較正常組明顯升高，INF-γ較正常組下降(P<0.05)。地塞米松治療組BALF中IL-4較哮喘組有所下降(P<0.05)，INF-γ較哮喘組無明顯改變(P>0.05)。CpG腹腔組和CpG滴鼻組IL-4均較哮喘組有明顯下降

6、(P<0.05)，INF-γ，較哮喘組及地塞米松組亦有升高(P<0.05)，其中CpG滴鼻組較腹腔注射組升高更加明顯(P<0.05)。
　　 4小鼠血清中IL-4及INF-γ表達水平變化哮喘組血清中IL-4較正常組明顯升高(P<0.05)，INF-γ較正常組明顯降低(P<0.05)，地塞米松組IL-4較哮喘組明顯降低(P<0.05)，INF-γ無明顯改變。CpG腹腔注射組及CpG滴鼻組血清IL-4較哮喘組均有所降低(P<0.05

7、)，INF-γ較哮喘組及地塞米松組均有升高(P<0.05)。CpG腹腔注射組與CpG滴鼻組相比較差別無統(tǒng)計學意義。
　　 5小鼠肺組織中的病理改變HE染色見正常對照組小鼠肺組織支氣管壁及周圍結構完整，未見或僅少許炎癥細胞浸潤，氣道管腔內(nèi)未見粘液栓塞等；哮喘組可見氣管粘膜上皮細胞脫落，周圍組織中大量炎癥細胞浸潤，以嗜酸性粒細胞為主，管腔內(nèi)可見多量分泌物；地塞米松組及CpG腹腔注射組以上改變較為輕微；CpG滴鼻組肺組織未見明顯嗜酸性

8、粒細胞浸潤，但有大量紅細胞滲出。
　　 6小鼠肺組織NF-κB表達水平改變正常對照組小鼠肺組織中僅有少量NF-κB表達；哮喘組中NF-κB表達明顯增加，在支氣管纖毛上皮，各種炎癥細胞均有表達，且以胞核內(nèi)表達為主，呈棕黃色。地塞米松治療組NF-κB表達較哮喘組明顯減少，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。CpG腹腔注射組NF-κB表達較哮喘組無明顯改變。CpG滴鼻治療組NF-κB較哮喘組和CpG滴鼻治療組有升高，且以胞內(nèi)強陽性表達為