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文檔簡介
1、目的:研究乙肝病毒X 蛋白(HBX)在肝臟卵圓細胞中通過AKT 信號對c-Jun 蛋白表達的調(diào)節(jié)作用。
方法:1.通過熒光顯微鏡、細胞免疫熒光、Western Blot鑒定HBX 蛋白在pEGFP-HBX-LE6細胞中的表達。
2.將pEGFP-HBX-LE6 卵圓細胞作為實驗組,L02-HBX細胞作為陽性對照組,LE6 卵圓細胞、轉(zhuǎn)染空載體的pEGFP-LE6 卵圓細胞為一般對照組。通過Western Bl
2、ot技術(shù)檢測p-Akt、AKT和c-Jun的蛋白表達水平。
3.用PI3K/AKT 信號通路特異性抑制劑LY294002 阻斷PI-3K/AKT 信號通路,通過Western Blot 技術(shù)檢測在AKT 通路被抑制后c-Jun 蛋白水平的變化。
結(jié)果:
1.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBX基因的pEGFP-HBX-LE6 及轉(zhuǎn)染空載體的pEGFP-LE6 卵圓細胞株在熒光顯微鏡下可見綠色熒光;HBX 蛋白在pEG
3、FP-HBX-LE6細胞中有表達;細胞免疫熒光顯示HBX在pEGFP-HBX-LE6 卵圓細胞中表達,且主要位于細胞核。
2.p-Akt、c-Jun 蛋白在pEGFP-HBX-LE6細胞中表達上調(diào)。
3.AKT 通路被抑制后,HBX 上調(diào)的c-Jun 蛋白在pEGFP-HBX-LE6中隨之下調(diào)。
結(jié)論:HBX在肝臟卵圓細胞中上調(diào)AKT 信號及c-Jun的蛋白表達,并且HBX 蛋白可通過AKT 信
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