帶有HPV-16 E6-E7基因的DC疫苗對裸鼠宮頸癌的抗腫瘤作用及相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:觀察由攜帶HPV-16 E6/E7基因的樹突狀細(xì)胞(Dendritic cell，DC)疫苗免疫得到的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)在裸鼠體內(nèi)對宮頸癌的抑制作用及相關(guān)機(jī)制的研究。
　　方法:體外誘導(dǎo)培養(yǎng)C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(Immature DC，imDC)，將已經(jīng)成功構(gòu)建的攜帶人乳頭狀瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)-16 E6/E7基因的

2、重組腺病毒感染imDC，Western blot檢測E7蛋白的表達(dá);構(gòu)建裸鼠的人宮頸癌CaSki細(xì)胞移植瘤模型，應(yīng)用DC疫苗誘導(dǎo)的BALB/c小鼠脾臟的CTL(Cytotoxic T lymphocytes)處理后，觀察裸鼠腫瘤體積變化，腫瘤長出第28 d后處死裸鼠，小心剝下腫瘤組織，石蠟包埋，HE染色觀察各組腫瘤的細(xì)胞形態(tài)，免疫組織化學(xué)技術(shù)法檢測腫瘤組織中Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)情況。CCK8(Cell counting kit8

3、)法檢測經(jīng)DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞的增殖;免疫組化法檢測裸鼠脾臟組織CD4+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)。
　　結(jié)果:成功培養(yǎng)出DC并制備出DC疫苗;第28d各組裸鼠腫瘤體積pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組與對照組pAd-mock-DC-CTL-CaSki組、DC-CTL-CaSki組、CaSki組相比較，pAd-E6E7-DC-CTL-C aSki組裸鼠腫瘤體積最?。≒＜0.05）;免疫組化檢測腫瘤組織中Ba

4、x蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示:pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組最高，而對照組CaSki組表達(dá)最低;免疫組化檢測腫瘤組織中Bcl-2蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示:pAd-E6E7-DC-CTL-CaSki組最低，而對照組CaSki組表達(dá)最高。CCK8法檢測經(jīng)DC疫苗免疫的BALB/c小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞的增殖，結(jié)果表明:pAd-E6/E7-DC組淋巴細(xì)胞OD值明顯高于pAd-mock-DC組、DC組和PBS組(P＜0.01);免疫組化檢測各組裸鼠