耳蝸雪旺細(xì)胞來源的Wnt1對(duì)耳蝸移植干細(xì)胞分化的影響及其分子機(jī)制研究.pdf

1、1、目的：神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells, NSC)的移植為神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病和損傷的治療提供了新的思路,但是移植入內(nèi)耳的神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化的效率很低,這成為移植的外源性神經(jīng)干細(xì)胞替代治療螺旋神經(jīng)神經(jīng)元(spiral ganglion neurons, SGNs)變性的主要障礙。在本研究中,我們驗(yàn)證了耳蝸螺旋神經(jīng)元損傷后的局部微環(huán)境更有利于移植的外源性神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化,并初步闡明了其分子機(jī)制。
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2、、方法：我們通過向耳蝸圓窗龕局部給予藥物ouabain建立大鼠螺旋神經(jīng)元損傷動(dòng)物模型。然后將分離、培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞移植進(jìn)入正常、及螺旋神經(jīng)元損傷后的耳蝸鼓階。用免疫熒光染色和實(shí)時(shí)定量RT-PCR等技術(shù)來鑒定螺旋神經(jīng)元損傷后內(nèi)耳局部微環(huán)境對(duì)移植的神經(jīng)干細(xì)胞分化的的影響,并初步闡明其分子機(jī)制。最后我們使用transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)通過體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證我們的假設(shè)。
　　3、結(jié)果：通過將外源性干細(xì)胞植入螺旋神經(jīng)元損傷的動(dòng)物耳蝸內(nèi),我們發(fā)現(xiàn),

3、與對(duì)照組耳蝸相比,移植的神經(jīng)干細(xì)胞在螺旋神經(jīng)元損傷耳蝸中更易分化成MAP2陽性的神經(jīng)元。采用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫熒光法,我們也證明了在螺旋神經(jīng)元損傷耳蝸內(nèi),螺旋神經(jīng)節(jié)內(nèi)衛(wèi)星細(xì)胞(雪旺細(xì)胞的一類,外周神經(jīng)節(jié)內(nèi)的雪旺細(xì)胞稱衛(wèi)星細(xì)胞)中Wnt1(Wnt信號(hào)通路配體)的表達(dá)顯著增加。我們進(jìn)一步證實(shí),神經(jīng)干細(xì)胞表達(dá)Wnt信號(hào)通路受體和Wnt信號(hào)通路胞內(nèi)關(guān)鍵組件。在以上結(jié)果基礎(chǔ)上我們提出假設(shè),雪旺細(xì)胞所產(chǎn)生Wnt1可能參與了移植神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分

4、化的調(diào)控。我們使用transwell共培養(yǎng)系統(tǒng)在體外驗(yàn)證這一假設(shè)。我們將感染了慢病毒載體高表達(dá)Wnt1的耳蝸雪旺氏細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng),結(jié)果顯示:與高表達(dá)Wnt1的雪旺細(xì)胞共培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞,分化為MAP2陽性神經(jīng)元的比例顯著增加,然而這種促進(jìn)分化的作用可被DKK1(Wnt信號(hào)通路抑制劑)抑制。
　　4、結(jié)論：這些結(jié)果表明,耳蝸雪旺氏細(xì)胞來源的Wnt1可激活移植神經(jīng)干細(xì)胞的胞內(nèi)Wnt信號(hào)通路,從而促進(jìn)其向神經(jīng)元的分化。詳盡的闡明