荷葉黃酮苷與苷元的制備及其降血糖初步研究.pdf

1、荷葉是一種重要的藥食兩用資源，廣泛分布于我國(guó)大部分地區(qū)，黃酮類物質(zhì)是其主要的活性成分。為了有效利用荷葉資源，本論文研究了荷葉總黃酮的提取、純化及其微生物酶法制備荷葉黃酮苷元的工藝條件，并初步比較了荷葉黃酮苷和苷元的降血糖及抗氧化效果。 超聲波能對(duì)荷葉組織產(chǎn)生明顯的破碎作用，超聲波輔助提取荷葉總黃酮工藝的最佳條件為：采用40倍50％的乙醇溶液，在700W的功率(20KHz)下超聲提取40min的提取效果最好，其黃酮得率可達(dá)14.4

2、9mg/g。纖維素酶法輔助提取荷葉黃酮的較佳條件是：采用0.5％的纖維素酶溶液在pH為4.5，溫度為45～50℃的緩沖液中酶解80min后，再采用50％的乙醇溶液75℃條件下浸漬提取。它們比傳統(tǒng)的溫浸法效率更高，節(jié)省能源和溶劑。大孔吸附樹脂HPD600用來(lái)純化荷葉總黃酮的效果較好，在pH為3.2左右時(shí)HPD600對(duì)荷葉黃酮的吸附量最大，使用80％的乙醇溶液解吸效果最好。當(dāng)動(dòng)態(tài)吸附的泄露點(diǎn)是4倍柱體積時(shí)，5倍柱體積80％的乙醇溶液可以洗脫

3、完全。經(jīng)初步純化得到總黃酮含量為58.2％的粉末。 為提高荷葉黃酮的生物效價(jià)，使用黑曲霉產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶可以較完全的酶解荷葉黃酮苷，得到槲皮素含量達(dá)75.34％的黃酮苷元，HPLC-MS分析證明了水解比較完全。在酶/底物為3：1，pH為4.5和溫度為45℃的條件下，酶解效率較高。轉(zhuǎn)化體系的量會(huì)影響轉(zhuǎn)化完全需要的時(shí)間，25mL荷葉黃酮(1.64mg/mL)反應(yīng)6.5h可以近乎完全的酶解。 采用四氧嘧啶糖尿病小鼠模型，初

4、步考察了荷葉黃酮苷元和黃酮苷的抗氧化和降血糖效果。結(jié)果表明：荷葉黃酮苷元高、低劑量組均能顯著升高肝組織的SOD、CAT‘活力(P<0.01)；高劑量組能顯著降低MDA水平(P<0.01)，升高GSH-Px活性(P<0.05)。荷葉黃酮苷的高劑量組也能顯著升高肝組織的CAT的活力(P<0.05)和SOD含量(P<0.05)，顯著降低MDA水平(P<0.05)。荷葉黃酮苷元的抗氧化活性明顯優(yōu)于黃酮苷。荷葉黃酮苷元的高劑量組能顯著降低糖尿病小