黑豆紅花色苷的優(yōu)化提取及其降血糖作用的研究.pdf

1、花色苷(Anthocyanin)是一類人們非常熟悉的天然水溶性食用色素，廣泛的分布在自然界中，全部的高等植物幾乎都可以合成出花色苷。水果、花朵、和蔬菜所呈現(xiàn)出的絕大多數(shù)的紅色、藍(lán)色、黃色和紫色都是因?yàn)樗疟憩F(xiàn)出來的，正是因?yàn)樗攀勾笞匀怀尸F(xiàn)出多姿多彩、五彩繽紛的景色。近年來人工合成色素對(duì)人體傷害很大因此被世界衛(wèi)生組織禁止使用，作為天然食用色素的花色苷因?yàn)橘Y源豐富、安全、無毒近年來引起人們的高度關(guān)注，又因?yàn)樗€具有一定的營養(yǎng)價(jià)值和藥理功能

2、，故在食品、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域都有巨大的應(yīng)用前景。
　　 黑豆是植物中營養(yǎng)最豐富的保健佳品之一，具有醫(yī)食同療的特殊功能，被譽(yù)為“豆中之王”，且在全國大部分地區(qū)都有栽種。黑豆紅是以黑豆皮為原料提制出的天然色素，花色苷是其中的主要成分。黑豆價(jià)格低廉，原料易得，非常符合工業(yè)化生產(chǎn)的需要，因此黑豆紅花色苷在食品和醫(yī)藥等領(lǐng)域都將具有很大的應(yīng)用前景。本文以廬州黑豆皮為實(shí)驗(yàn)材料，從單純乙醇溶液提取、果膠酶輔助提取黑豆紅花色苷、纖維素酶輔助提取黑

3、豆紅花色苷這三方面來對(duì)黑豆紅花色苷的優(yōu)化提取進(jìn)行研究，再選用適宜的大孔樹脂進(jìn)行純化，分析影響黑豆紅花色苷穩(wěn)定性的因素，并進(jìn)一步對(duì)黑豆紅花色苷降血糖的作用機(jī)制進(jìn)行了探討。研究結(jié)果如下：(1)以黑豆皮為材料，以提取溫度(X1)、提取時(shí)間(X2)、乙醇濃度(X3)以及料液比(X4)這四個(gè)因素進(jìn)行四因子二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)，建立的黑豆紅花色苷提取條件的數(shù)學(xué)回歸模型為：
　　 Y=1.18871+0.00288X1+0.02987X2_0

4、.08929X3+0.1517X4_0.07758X12_0.00996X22_0.16071X32-0.04396X42-0.05169X1X2+0.07756X1X3+0.05606X1X4+0.02969X2X3+0.0004X2X4-0.05381X3X4
　　 利用上述方程得出黑豆紅花色苷提取的最佳條件為料液比為1:50g/mL，提取時(shí)間為1小時(shí)，提取溫度為60℃，乙醇濃度為60％。在此優(yōu)化條件下提取的花色苷含量為1.

5、397mg/g。
　　 (2)黑豆紅花色苷粗提物經(jīng)過石油醚和乙酸乙酯萃取后，水部清除DPPH能力比石油醚、乙酸乙酯部要強(qiáng)。且分離純化黑豆紅花色苷比較合適的大孔樹脂為AB-8大孔樹脂，它對(duì)于花色苷的吸附率為63.27％，解析率為82.24％;吸附的最適上樣濃度為每10mL AB-8大孔樹脂6mg/5mL，上樣流速為5mL/min;吸附平衡時(shí)間為30min;洗脫液乙醇濃度為70％。建立了用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉pH6.0的緩沖液，溫

6、度25℃、電壓28KV、電流53.5μA、進(jìn)樣壓力0.5psi、波長(zhǎng)220nm、分離時(shí)間10分鐘的條件下進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析的方法。通過高效毛細(xì)管電泳法獲得所提花色苷樣品中含有矢車菊素-3-O-葡萄糖苷，且1.0g黑豆皮中含有的矢車菊素-3-O-葡萄糖苷的含量為0.454mg。
　　 (3)對(duì)影響黑豆紅花色苷穩(wěn)定性的因素進(jìn)行分析，結(jié)果表明：黑豆紅花色苷的耐光性、耐熱性、耐氧化都較差，應(yīng)該盡量避光、低溫、密封保存。氯化鈉、維生素C以

7、及葡萄糖對(duì)黑豆紅花色苷的穩(wěn)定性無不良影響，但檸檬酸和蔗糖卻能影響該花色苷的穩(wěn)定性。
　　 (4)通過對(duì)不同組的正常小鼠和利用四氧嘧啶造模的實(shí)驗(yàn)性糖尿病小鼠分別進(jìn)行相應(yīng)濃度的黑豆紅花色苷腹腔注射，并測(cè)定血糖、超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)以及胰島素含量。結(jié)果表明：黑豆紅花色苷具有降低糖尿病小鼠高血糖的作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)的創(chuàng)新點(diǎn)
　　 (1)對(duì)單

8、純乙醇溶液提取、果膠酶輔助提取、纖維素酶輔助提取黑豆紅花色苷這三方面來對(duì)黑豆紅花色營的優(yōu)化提取進(jìn)行研究，結(jié)果：?jiǎn)渭兯峄掖既芤禾崛⌒Ч詈谩?br>　　 (2)利用高效毛細(xì)管電泳法(HPCE)對(duì)黑豆紅花色苷進(jìn)行定量分析，建立了用磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉pH6.0的緩沖液，在溫度25℃、電壓28KV、電流53.5μA、進(jìn)樣壓力0.5psi、波長(zhǎng)220nm、分離時(shí)間10分鐘的條件下進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析的方法。同時(shí)利用該法得出所提花色苷樣品中應(yīng)