異黃酮苷元超聲輔助轉(zhuǎn)化提取與制備及抗氧化活性研究.pdf

1、大豆異黃酮是在大豆生長過程中所形成的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物,屬于多酚類化合物。異黃酮在大豆中的存在形式為結(jié)合型糖苷與游離苷元,結(jié)合型糖苷占總量的97％-98%,游離苷元僅占2%-3%。異黃酮具有多種生物活性,游離型異黃酮苷元是其主要活性成分,但游離型苷元含量極低,異黃酮苷元的水解轉(zhuǎn)化方法及提取制備一直是人們研究的熱點(diǎn)。本文研究從豆粕中提取制備異黃酮苷元及檢測其抗氧化活性,主要分為以下三個(gè)內(nèi)容:
　　1、異黃酮苷元水解轉(zhuǎn)化方法研究及提取工

2、藝條件優(yōu)化
　　通過單因素與正交設(shè)計(jì)方法建立了三種異黃酮苷元的提取方法:
　　1.1、兩相體系超聲輔助水解的方法,最佳工藝條件:超聲時(shí)間75min,溫度60℃,苷元的提取率0.091%。
　　1.2、兩相體系超聲輔助酶水解的方法,最佳工藝條件:超聲時(shí)間60min,溫度45℃,酶量10U,pH5,苷元提取率0.2138%。
　　1.3、兩相體系超聲輔助酸水解的方法,最佳工藝條件:超聲時(shí)間75min,溫度55℃,鹽酸

3、濃度1.5mol/L,苷元提取率0.1815%。
　　比較三種方法,兩相體系超聲輔助酶水解的方法苷元提取率最高,并且條件更溫和,更高效。
　　2、異黃酮苷元的純化制備及含量測定
　　2.1、提取的異黃酮苷元粗品先經(jīng)過大孔樹脂層析,采用梯度洗脫的方法,先用極性較大的醇水洗脫除去油脂、蛋白、無機(jī)鹽等粘稠雜質(zhì),再用極性較小的醇水洗脫苷元。然后采用硅膠柱層析,按TLC條件選擇洗脫溶液,進(jìn)一步純化苷元,得到高純度異黃酮苷元。

4、r>　　2.2、經(jīng)HPLC測定,異黃酮苷元最終總純度為68.53%,其中大豆苷元24.58%,黃豆黃素1.32%,染料木素42.63%。
　　3、異黃酮苷元抗氧化活性實(shí)驗(yàn)
　　3.1、建立H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的模型,從細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞存活率兩方面考察H2O2誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷的最佳濃度,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明H2O2濃度為150μmol/L時(shí),細(xì)胞損傷效果顯著、穩(wěn)定,適合用于建立細(xì)胞損傷模型。
　　3.2、通過H2O2