BDNF、GDNF在外傷性癲癇病人腦組織中表達的研究.pdf

1、研究目的： 外傷性癲癇是顱腦損傷后常見的嚴重并發(fā)癥之一，顱腦損傷是臨床醫(yī)學及法醫(yī)學上十分常見的損傷，而且隨著社會發(fā)展其發(fā)生率逐年升高。顱腦外傷后癲癇的發(fā)生率隨著損傷后研究的時間不同、研究人群的年齡和原發(fā)性損傷的嚴重程度差異而變化。目前，國內(nèi)外對外傷性癲癇的研究尚不深入，其發(fā)病機制尚未闡明。外傷性癲癇的法醫(yī)學鑒定是目前實際檢案的難點，尤其是影像學上未見明顯病灶的顱腦外傷后引發(fā)的癲癇，在法醫(yī)學鑒定中經(jīng)常引起爭議。對法醫(yī)學家而言，如何

2、確定癲癇與外傷的關(guān)系、外傷究竟是誘發(fā)因素還是直接因素、顱腦外傷對癲癇的損傷參與度等仍然是需要深入研究的課題。研究外傷性癲癇的發(fā)病機制對以上問題的解決具有重要意義。 BDNF和GDNF可以對受損傷的神經(jīng)元起正向的修復作用，參與神經(jīng)突觸重建過程，動物實驗表明，注入BDNF、GDNF或者導入二者cDNA以增加其表達可以有效修復受損神經(jīng)細胞，但目前對二者的突觸重建研究，多集中在動物實驗和外周神經(jīng)損傷等方面，對癲癇病人，特別是外傷性癲癇病

3、人標本的研究尚罕見報道。本實驗擬在前人相關(guān)研究的基礎(chǔ)上，用western blot和免疫組化的方法探索BDNF和GDNF在原發(fā)性癲癇和外傷性癲癇病人腦組織標本中的表達情況，并將其與正常腦組織中的表達情況進行對比，探討其法醫(yī)學意義，以期為闡明癲癇發(fā)病機制及為外傷性癲癇法醫(yī)鑒定提供新的思路和實驗基礎(chǔ)。研究方法本實驗分為三組，共收集75例腦皮質(zhì)樣本。其中腦外傷后癲癇灶皮質(zhì)30例(外傷性癲癇實驗組)、非腦外傷后癲癇灶皮質(zhì)30例(非外傷性癲癇組)

4、，對應于各癲癇灶的部位收集失血性休克死亡者腦皮質(zhì)共15例(對照組)。 實驗研究方法如下： 第一，對所收集的皮質(zhì)樣本均進行HE染色，鏡下觀察各組標本的形態(tài)學改變。 第二，對各組樣本進行腦源性神經(jīng)生長因子、膠質(zhì)細胞源性神營養(yǎng)因子免疫組化染色觀察；采用圖像分析系統(tǒng)對神經(jīng)元形態(tài)、免疫組化指標進行量化指標測定。 第三，運用western blot技術(shù)量化腦源性神經(jīng)生長因子、膠質(zhì)細胞源性神營養(yǎng)因子在各組標本中的表達量

5、，精確比較二者在外傷性癲癇組、非外傷性癲癇組和對照組中表達量的變化及差異。 研究結(jié)果： 1、HE染色結(jié)果 外傷性癲癇組和非外傷性癲癇組均存在神經(jīng)細胞核固縮，神經(jīng)軸突彎曲甚至呈螺旋狀，胞體縮小變形，胞體周圍有水腫造成的空隙，細胞內(nèi)尼氏小體消失，胞漿變性、腫脹甚至呈空泡狀，染色呈深伊紅色，膠質(zhì)細胞明顯增生，并可見嗜神經(jīng)細胞現(xiàn)象(壞死的神經(jīng)細胞被增生的小膠質(zhì)細胞圍繞吞噬)及小膠質(zhì)細胞結(jié)節(jié)。 對照組有部分神經(jīng)細胞

6、核固縮，深染，胞體縮小變形，部分細胞內(nèi)尼氏小體消失，胞漿變性，染色呈深伊紅色。 2、免疫組織化學染色 1)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)主要在外傷性癲癇組與非外傷性癲癇組癲癇灶皮質(zhì)的神經(jīng)細胞胞漿中表達，對照組中微量表達；與對照組比較，外傷組癲癇組BDNF表達顯著增高；與非外傷性癲癇組比較，外傷性癲癇組BDNF的表達增加有統(tǒng)計學意義。 2)膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)主要在外傷性癲癇組與非外傷性癲癇組癲癇灶

7、皮質(zhì)的神經(jīng)細胞胞漿中表達，對照組中微量表達；與對照組比較，外傷組癲癇組GDNF表達顯著增高；與非外傷性癲癇組比較，外傷性癲癇組GDNF的表達有統(tǒng)計學意義。 3、western blot結(jié)果 1)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)在外傷性癲癇組和非外傷性癲癇組表達量增加，對照組微量表達，蛋白條帶位于13.5KD處。 2)膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)在外傷性癲癇組和非外傷性癲癇組表達量增加，對照組微量表達，蛋白條

8、帶位于15KD處。 4、計算機圖像分析和統(tǒng)計分析結(jié)果外傷性癲癇組BDNF表達的陽性指數(shù)是4.339±1.738，非外傷性癲癇組BDNF表達的陽性指數(shù)是0.5137±0.0076，對照組BDNF表達的陽性指數(shù)是0.056±0.0004，外傷性癲癇組與對照組t檢驗結(jié)果：t=11.307，P<0.05，有統(tǒng)計學意義；外傷性癲癇組與非外傷性癲癇組t檢驗結(jié)果：t=5.652，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。 外傷性癲癇組GDNF表達的

9、陽性指數(shù)是1.8839±0.6279，非外傷性癲癇組GDNF表達的陽性指數(shù)是0.6071±0.0107，對照組GDNF表達的陽性指數(shù)是0.2532±0.0032，外傷性癲癇組與對照組t檢驗結(jié)果：t=7.1 104，P<0.05，有統(tǒng)計學意義；外傷性癲癇組與非外傷性癲癇組t檢驗結(jié)果：t=5.5347，P<0.05，有統(tǒng)計學意義。 研究結(jié)論： 1、HE染色結(jié)果分析顯示外傷性癲癇及非外傷性癲癇患者癲癇灶存在明顯的形態(tài)學改變，例