IL-24對上皮性卵巢癌SKOV3細胞株生物學的影響研究（臨床前研究）.pdf

1、目前，以手術、放療、化療和內分泌治療為主的綜合治療模式提高了癌癥患者的生存率，但卵巢癌的復發(fā)和轉移率仍較高。生物治療應用于卵巢癌的臨床前實驗研究取得了較大進展，給卵巢癌特別是晚期患者的治療帶來了新的希望。 IL-24基因是一重要的抑癌基因，其過量表達能選擇性地抑制黑色素瘤細胞分化并誘導其凋亡，如功能喪失將導致黑色素瘤生長加快并具侵襲性。國外學者利用IL-24基因的重組腺病毒制劑用于20株癌細胞進行實驗，發(fā)現有19株癌細胞發(fā)生了凋

2、亡。 IL-24基因表達產物能誘導多種腫瘤細胞調亡，但不影響正常細胞，且具有通過刺激免疫應答來發(fā)揮抗腫瘤的活性。所以IL-24被認為具有廣闊的臨床應用前景，對其功能的研究極具理論和臨床意義。 為探索IL-24對上皮性卵巢癌SKOV3細胞株生物學的影響，本實驗分為四個部分：第一部分 IL-24真核表達載體pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的構建及鑒定；第二部分穩(wěn)定轉染pcDNA3.1-myc-his(-)

3、B-IL-24的上皮性卵巢癌SKOV3細胞株增殖、細胞周期、凋亡率及相關凋亡蛋白的變化；第三部分IL-24對上皮性卵巢癌SKOV3細胞株放療敏感性的改變觀察；第四部分穩(wěn)定轉染pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的上皮性卵巢癌SKOV3細胞株裸鼠成瘤試驗，IL-24對上皮性卵巢癌SKOV3細胞株裸鼠移植瘤模型治療試驗研究。 目的：IL-24真核表達載體pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24的構建及鑒定

4、。 方法：分離人外周血淋巴細胞，提取細胞總RNA，自行設計特異性引物，對IL-24編碼序列進行克隆，通過基因重組，連接到pcDNA3.1-myc-his(-)B載體上，構建IL-24真核表達載體pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24，用PCR、酶切鑒定和序列測定證實序列無誤后，大量擴增。 結果： 1、正常人外周血淋巴細胞中提取的總RNA質量檢測：從正常人外周血淋巴細胞中提取的總RNA，經1％瓊脂糖凝

5、膠電泳，可見28s、18s、5s三條帶，且28s的光密度值是18s的兩倍，表示該RNA樣品完整性好，降解少。 2、總RNA經RT-PCR擴增IL-24基因：以總RNA為模板，RT-PCR擴增IL-24 cDNA，經瓊脂糖凝膠電泳擴增出約為600+bp大小的特異性條帶，與預期設計的IL-24 cDNA大小相符。 3、PCR鑒定：以構建的真核表達載體pcDNA3.1-myc-his(-)B-IL-24為模板，PCR擴增IL-

6、24 DNA，經1％瓊脂糖凝膠電泳，擴增出約為600+bp大小的特異性條帶，與預期設計的IL-24 DNA大小相符。 4、酶切鑒定：經藍白篩選后，挑取數個單菌落擴增，提取質粒，用BamHI和Hind Ⅲ雙酶切，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質粒出現兩條帶，約5.4Kb、600+bp大小，分別與pcDNA3.1-myc-his(-)B和IL-24基因片段大小一致。pcDNA3.1-myc-his(-)B上有兩個Xba I酶切位點

7、，用Xba I單酶切后，1％瓊脂糖凝膠電泳，可見被酶切的質粒出現兩條帶，約5.4Kb、600+bp大小，分別與pcDNA3.1-myc-his(-)B和IL-24基因片段大小一致。 5、質粒的測序結果：對經上述鑒定后符合要求的質粒交invitrogen公司進行序列測定，經NCBI提供的BLAST程序分析對比，結果顯示本實驗獲得的IL-24序列與genebank公布的IL-24基因序列完全一致，符合預期結果。 結論：