IL-24對卵巢癌SKOV3細胞增殖的抑制作用研究.pdf

1、背景：卵巢癌是人類最難治愈的腫瘤之一。傳統(tǒng)的治療方法包括手術、化療、放療及綜合治療等均無法明顯提高患者的五年存活率，因此探討新的更有效的卵巢癌的治療方法十分重要和迫切。近年認為基因治療最具有臨床應用前景。白細胞介素-24(IL-24)是一種新發(fā)現的具有明顯抗腫瘤作用而對正常細胞沒有影響的細胞因子，成為腫瘤基因治療的研究熱點。國內外探討IL-24用于卵巢癌基因治療的研究不多。為此在前期實驗工作中以構建好了真核表達載體pcDNA3.1(一)

2、-IL-24并測序鑒定的基礎上，設計了本實驗。 目的：探討IL-24對卵巢癌細胞系SKOV3增殖的影響。 方法：用電轉染法將重組真核表達載體pcDNA3.1(一)-IL-24穩(wěn)定轉染SKOV3細胞，經G418篩選后獲得陽性細胞克??；用RT-PCR方法檢測鑒定目的基因mRNA表達；四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測細胞體外增殖狀況。同時以轉染空載體pcDNA3.1(一)的SKOV3細胞和野生型SKOV3細胞作為空載體對照和陰性

3、對照。 結果： 1．轉染48h換用G418選擇性培養(yǎng)基后，大部分轉染pcDNA3.1(一)-IL-24及pcDNA3.1(一)的SKOV3細胞(分別用IL-24轉染組和空載體轉染組表示)在一周后死亡，少數細胞繼續(xù)生長增殖，在選擇培養(yǎng)基中生長2周有抗性細胞集落形成；而野生型SKOV3細胞(陰性對照組表示)則在一周后完全裂解死亡。 2．基因轉染后，IL-24轉染組、空載體轉染組及陰性對照組SKOV3細胞抽提總的RNA

4、，經RT-PCR檢測表明，IL-24轉染組SKOV3細胞在600+bp處出現陽性條帶，空載體轉染組及陰性對照組SKOV3細胞未見相似的陽性條帶。凝膠圖像分析儀分析IL-24mRNA相對表達水平，結果顯示空載體轉染組和陰性對照組SKOV3細胞中IL-24mRNA相對表達水平為0；IL-24轉染組SKOV3細胞中IL-24mRNA相對表達水平為0.18±0.03。 3．IL-24轉染組、空載體轉染組及陰性對照組SKOV3細胞MTT