LCN-2對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖及遷移的影響.pdf

1、卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，病死率極高，嚴(yán)重威脅著廣大婦女的身心健康。由于缺乏有效的篩查手段，多數(shù)患者確診時(shí)已處于晚期。在卵巢癌有明顯癥狀時(shí)血清CA125、CA199等可作為監(jiān)測(cè)病情的腫瘤抗原標(biāo)記物，其敏感性較高，但特異性較差。為此，我們建立卵巢癌細(xì)胞模型尋找特異性腫瘤抗原標(biāo)記物，并檢測(cè)其在卵巢癌中的表達(dá)情況、以及對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及遷移的影響，為今后進(jìn)一步探討卵巢癌發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以期為卵巢癌的防治提供新的思路和靶點(diǎn)。<

2、br>　　目的：脂質(zhì)運(yùn)載蛋白-2(lipocalin-2,LCN-2)屬于脂質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的第2號(hào)成員，LCN-2的上調(diào)與肝癌，乳腺癌，卵巢癌等多種人類腫瘤相關(guān)。然而，LCN-2在腫瘤細(xì)胞中的生物學(xué)作用還不是很清楚。本研究通過觀察LCN-2在四種卵巢癌細(xì)胞系中的表達(dá)情況，并使用穩(wěn)定過表達(dá)LCN-2的方法檢測(cè)其對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖及遷移的影響，為進(jìn)一步研究LCN-2在卵巢癌細(xì)胞中的作用機(jī)制提供前期實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：應(yīng)用RT-qPCR

3、技術(shù)在mRNA水平上檢測(cè)四種卵巢癌細(xì)胞系（CAOV3,ES2,OVCAR3,SKOV3）中LCN-2的表達(dá)情況；應(yīng)用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法觀察過表達(dá)LCN-2對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；應(yīng)用MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)LCN-2對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響；應(yīng)用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過表達(dá)LCN-2對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞遷移的影響。
　　結(jié)果：
　　1、RT-qPCR結(jié)果顯示：在mRNA水平上LCN-2的表達(dá)在四種卵巢癌細(xì)胞系中由高

4、到低的趨勢(shì)是：在CAOV3和OVCAR3呈高表達(dá)，在SKOV3表達(dá)較弱，在ES2表達(dá)最弱，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2、成功構(gòu)建LCN-2穩(wěn)定過表達(dá)的SKOV3細(xì)胞克隆。
　　穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體或目的質(zhì)粒的SKOV3細(xì)胞系后，用1200μg/mlG418進(jìn)行篩選，約四周后細(xì)胞克隆形成。RT-qPCR和Westernblot方法檢測(cè)結(jié)果顯示，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2基因的SKOV3細(xì)胞中LCN-2蛋白表達(dá)量均顯著高于未轉(zhuǎn)

5、染組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)SKOV3細(xì)胞克隆和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染LCN-2后的SKOV3細(xì)胞克隆形態(tài)無(wú)明顯變化。
　　3、MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，結(jié)果顯示：過表達(dá)LCN-2與對(duì)照組比較，對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　4、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：過表達(dá)LCN-2與對(duì)照組相比，明顯促進(jìn)了卵巢癌SKOV3細(xì)胞的遷移，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。