人參皂甙Rd對(duì)缺血性腦損害的保護(hù)作用.pdf

1、卒中是世界第二大死因，在發(fā)達(dá)國(guó)家是喪失勞力修正壽命年的第二大原因，在我國(guó)女性死因中列第二位，男性死因中列第三位。缺血性卒中約占卒中的80％，其早期治療主要有兩種途徑：血管再通和神經(jīng)保護(hù)治療。使用tPA溶栓治療受限于其過(guò)窄的時(shí)間窗和對(duì)出血等并發(fā)癥的擔(dān)心，尚不能廣泛應(yīng)用。神經(jīng)保護(hù)的目標(biāo)是挽救缺血半暗帶尚具活力的腦組織，雖然很多神經(jīng)保護(hù)藥物未能在臨床試驗(yàn)中證實(shí)其有效性，但其仍是卒中早期治療研究中的熱點(diǎn)，極具挑戰(zhàn)性。
　　人參皂甙Rd（G

2、SRd）是人參皂甙的主要活性成分之一，在三七中的含量高達(dá)4.07％，實(shí)際應(yīng)用經(jīng)濟(jì)。近來(lái)研究表明GSRd能夠拮抗Ca2+通道，對(duì)紅藻氨酸和氧化損傷中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)使用海馬神經(jīng)元氧糖剝奪（OGD）模型和大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞（MCAO）模型，探討了GSRd的神經(jīng)保護(hù)作用和可能的作用機(jī)制。
　　1.體外實(shí)驗(yàn)
　　目的研究GSRd對(duì)海馬神經(jīng)元OGD損傷模型的保護(hù)作用和可能的作用機(jī)制。方法細(xì)胞取材自孕18天胎鼠，以B27/

3、Neurobasal培養(yǎng)基培養(yǎng)神經(jīng)元。體外培養(yǎng)至第6-8天進(jìn)行OGD實(shí)驗(yàn)。OGD持續(xù)2h，之后復(fù)糖復(fù)氧24h。一組實(shí)驗(yàn)中GSRd在OGD前及OGD結(jié)束復(fù)氧開(kāi)始時(shí)兩次給藥，另一組實(shí)驗(yàn)研究GSRd延后治療的效果，僅在OGD結(jié)束，復(fù)氧開(kāi)始時(shí)給藥。24h后使用LDH法和Hoechst33342/PI雙重染色法來(lái)評(píng)定細(xì)胞活力。用熒光染料DCFH-DA來(lái)顯示活性氧簇（ROS），用羅丹明123來(lái)顯示線粒體膜電位（MMP）。熒光強(qiáng)度用流式細(xì)胞儀來(lái)測(cè)定。

4、細(xì)胞丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性用試劑盒以分光光度法來(lái)測(cè)量。我們還研究了GSRd對(duì)抗谷氨酸興奮性毒性的保護(hù)作用。結(jié)果PI吸收法顯示2h的OGD能夠造成約50％的細(xì)胞壞死，GSRd（0.1-10μM）能夠顯著的降低壞死細(xì)胞數(shù)量。LDH法也得出相似的趨勢(shì)。相反地，GSRd延后給藥未能顯示出顯著的保護(hù)作用。OGD后，ROS增加到基線的2.08倍，GSRd能夠顯著的降低ROS的蓄積，降低MDA水平，提高SOD活性。OGD導(dǎo)

5、致線粒體去極化，表現(xiàn)為羅丹明123的熒光強(qiáng)度降為基線的40.3％，GSRd能夠穩(wěn)定MMP。在興奮性毒性的模型上，谷氨酸導(dǎo)致大量LDH漏出，顯示明顯的細(xì)胞損傷。戲劇性地，GSRd幾乎能夠完全消除這一損傷作用。結(jié)論GSRd在培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元上對(duì)OGD損傷具有保護(hù)作用，這可能與其能夠抑制氧化應(yīng)激損傷，保持MMP和對(duì)抗谷氨酸毒性作用有關(guān)。
　　2.在體實(shí)驗(yàn)
　　目的在局灶性腦缺血大鼠模型上進(jìn)一步探討GSRd的神經(jīng)保護(hù)作用。方法用線栓

6、法來(lái)制備局灶性腦缺血模型，缺血持續(xù)2h，再灌注同時(shí)給予GSRd或溶劑（生理鹽水）對(duì)照給予治療。24h后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損檢查并且用TTC染色法評(píng)估腦梗死體積。結(jié)果再灌注24h后，與溶劑治療組相比，GSRd治療組的動(dòng)物在神經(jīng)行為學(xué)上顯示出明顯的改善(GSRd10mg/Kg,P=0.012;GSRd30mg/Kg,P=0.002)。溶劑治療組動(dòng)物的平均腦梗死體積為232.7mm3。GSRd治療能夠顯著的降低梗死體積（10mg/Kg,189.2