人參皂甙Rd抑制腦缺血炎癥損傷的作用及機制研究.pdf

1、腦卒中是一種致病機制復雜,嚴重影響人類生存和生活質量的災難性疾病。盡管目前在治療方面取得部分相關進展,但是研究者對于如何保護卒中相關的腦損傷知之甚少。這就導致具有明確神經保護作用,能夠安全運用于臨床的藥物少之又少。因此,開發(fā)具有明確保護作用的藥物對腦卒中治療具有重要的意義。人參和三七是亞洲地區(qū)應用廣泛的傳統(tǒng)中草物,悠久的用藥史證實用藥安全有效。近來研究逐步揭示人參皂甙(ginsenosides,GS)及其有效單體成分GSRb、GSRg、

2、GSRd等具有不同程度的腦損傷保護作用。其中,我們課題組前期的實驗工作證實,人參皂甙Rd(ginsenosides Rd,GSRd)能夠減輕谷氨酸興奮性毒性損傷,抑制神經元胞內鈣超載,減少腦缺血后的氧化應激損傷,改善線粒體功能方面,具有肯定的神經保護作用。二期和三期的臨床試驗同樣表明GSRd治療急性缺血性腦卒中患者安全有效。更為重要的是,我們發(fā)現(xiàn)在腦缺血急性期后應用GSRd,仍然能發(fā)揮有效的腦損傷保護作用;考慮到炎癥反應是腦缺血后期重要

3、的病理過程,我們推測GSRd抑制炎癥損傷可能是其發(fā)揮效應的重要機制之一。
　　因此,本課題旨在研究GSRd對實驗性腦缺血后的炎性反應的影響及其可能的作用機制;同時結合GSRd和皮質類固醇的化學結構十分相似的特點,將GSRd和激素類藥物的作用及不良反應進行比較,為GSRd臨床應用于腦卒中治療提供理論依據(jù)。
　　實驗一人參皂甙Rd抑制實驗性腦缺血炎性反應的研究
　　目的:探討GSRd對實驗性腦缺血后的炎性反應的影響。

4、>　　方法:分別采用大鼠大腦中動脈阻塞再灌注模型、LPS炎性損傷模型和氧糖剝奪模型模擬腦缺血再灌注炎性損傷,以米諾環(huán)素、地塞米松(dexamethasone,DEX)、米非司酮(RU486)作為對照。使用TTC染色測定腦梗死體積,MTT檢測GSRd對炎性損傷神經元存活率的影響。使用實時定量PCR技術和液相芯片技術檢測GSRd(10mg/Kg)分別對缺血后炎性細胞因子mRNA和蛋白表達的影響。
　　結果:(1)10mg/Kg GSR

5、d預先給藥能夠有效減少大鼠缺血后的腦梗死體積,提高受損神經元的存活數(shù)量。DEX和RU486對缺血后腦梗死體積不產生影響。
　　(2)GSRd、DEX和米諾環(huán)素預處理能夠減少多種炎性細胞因子mRNA和蛋白的表達,從而減輕缺血后的炎性損傷,但三者的抗炎作用沒有顯著性差異。
　　(3)RU486可以阻斷或部分阻斷GSRd和DEX對細胞因子的抑制作用。
　　結論:GSRd預處理能夠保護腦缺血模型下的神經元,這種作用可能與其減輕

6、損傷后的炎性反應、抑制細胞因子表達密切相關。
　　實驗二人參皂甙Rd通過作用糖皮質激素受體發(fā)揮抗炎效應的研究
　　目的:探討GSRd作用糖皮質激素受體發(fā)揮抗炎效應的作用機制。
　　方法:OGD損傷后,使用GSRd(10μM)進行干預后,使用qRT-PCR檢測不同干預處理組NFκB p65 mRNA的表達。使用 Western Blot檢測糖皮質激素受體(glucocorticoid receptor,GR)通路關鍵蛋白

7、(GR、p-IκBα/IκBα、p-p38/p38、NFκB p65)的表達水平。
　　結果:(1)NFκB是一種調控炎性細胞因子表達的重要轉錄因子。GSRd預處理能夠抑制IκBα磷酸化和NFκB P65入核,從而抑制NFκB活性。
　　(2)p38是維持炎性細胞因子穩(wěn)定表達的重要因子。GSRd預處理能夠抑制p38 MAPK磷酸化,減低p-p38/p38比值,降低p38活性。
　　(3)GR激活可同時調控其下游的NFκ

8、B和p38分子。GSRd預處理能夠促進GR轉位入核,GR抑制劑RU486可以部分阻斷GSRd對缺血后GR通路蛋白表達的調節(jié)作用。
　　結論:GSRd可抑制炎癥調控因子NFκB和p38的活性,這種作用可能是與其激活GR密切相關。
　　實驗三人參皂甙Rd與糖皮質激素抗炎效應及不良反應的對比研究
　　目的:糖皮質激素的特點是抗炎作用強大和用藥不良反應廣泛。研究對比GSRd與DEX使用后的抗炎效應及不良反應。
　　方法:

9、分別探討GSRd和DEX對代謝、免疫和骨形成方面的影響。健康C57/B6小鼠分別注射4周10mg/Kg GSRd和2.5mg/Kg DEX,對比不同干預對小鼠血糖水平,胸腺、脾臟和體重質量的改變;采用膠原誘導關節(jié)炎模型對比GSRd和DEX對關節(jié)炎癥的作用;觀察不同濃度GSRd(10nM-10μM)和DEX(10nM-10μM)對體外培養(yǎng)成骨細胞系MC3T3-E1的增殖和分化影響。
　　結果:(1)和正常組相比,GSRd組小鼠的血糖

10、、胸腺、脾臟、體重無明顯變化;相反,DEX組小鼠的血糖升高、胸腺、脾臟和體重質量明顯下降(p<0.05)。
　　(2)膠原誘導關節(jié)炎模型小鼠實驗中,GSRd和DEX均可減輕關節(jié)炎性細胞浸潤,兩者之間無顯著差異。
　　(3)在成骨細胞培養(yǎng)實驗中,GSRd和DEX均有促成骨細胞增殖和成分化的作用,但GSRd的有效劑量范圍較廣(10nM-1μM)。
　　結論:與DEX相比,GSRd的抗炎作用同樣強大,不會影響血糖、體重和免疫