電針聯(lián)合人參皂甙Rd的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、背景：
　　腦卒中因其高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率，對(duì)人類健康和生命安全產(chǎn)生了極大的危害。隨著科學(xué)研究和臨床實(shí)踐的不斷深入，腦卒中的防治策略也不斷完善，但腦卒中的臨床治療中仍存在諸多難題，治療時(shí)間窗窄，藥物副作用大等問題亟待解決，因此亟需尋找新的治療方法。
　　缺血性腦卒中發(fā)生和發(fā)展的進(jìn)程極為復(fù)雜，受多種因素影響，其中氧化應(yīng)激反應(yīng)是重要的病理生理過(guò)程。氧化應(yīng)激是缺血后級(jí)聯(lián)瀑布進(jìn)程中重要的網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)，引發(fā)腦血流量進(jìn)一步降低，并攻

2、擊生物大分子，引起細(xì)胞壞死、自噬和凋亡。
　　電針具有經(jīng)濟(jì)實(shí)用、簡(jiǎn)便易行、操作性強(qiáng)、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，易于被患者接受，適合應(yīng)用于缺血性腦卒中的臨床方案。電針預(yù)處理減少了丙二醛等的生成，激活體內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)。還可以提高線粒體呼吸鏈的功能和抗氧化能力，從而發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)效應(yīng)。人參皂甙Rd是一種主要的人參皂甙單體提取物。離體試驗(yàn)和在體實(shí)驗(yàn)均證明人參皂甙Rd對(duì)缺血性腦損傷具有良好的治療效果。人參皂甙Rd可通過(guò)直接清除活性氧、減輕自由基對(duì)細(xì)胞的

3、損傷作用、有效抑制腦缺血過(guò)程中的過(guò)氧化反應(yīng)發(fā)揮抗氧化作用。人參皂甙Rd具有較長(zhǎng)的血漿半衰期。具有很高的脂溶性，能夠透過(guò)生物膜，也能夠透過(guò)血腦屏障到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，使其顯示出獨(dú)特的臨床應(yīng)用潛力，但是人參皂甙Rd只有在缺血后4h使用具有治療效果，較短的治療時(shí)間窗限制了其臨床應(yīng)用。
　　因此本研究觀察電針聯(lián)合人參皂甙Rd對(duì)減輕大鼠局灶性腦缺血損傷能否發(fā)揮協(xié)同作用，并探索其具體作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)一、電針聯(lián)合人參皂甙Rd對(duì)大鼠局灶性

4、腦缺血損傷的保護(hù)作用
　　目的：探討電針聯(lián)合人參皂甙Rd對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷是否具有協(xié)同保護(hù)作用。
　　方法：雄性SD大鼠64只，隨機(jī)分為對(duì)照組(MCAO組)、電針組（EA組）、人參皂甙Rd6h組(GSRd6h組)、人參皂甙Rd8h組(GSRd8h組)、人參皂甙Rd10h組(GSRd10h組)、電針聯(lián)合人參皂甙 Rd6h組(EA+GSRd6h組)、電針聯(lián)合人參皂甙 Rd8h組(EA+GSRd8h組)、電針聯(lián)合人參皂甙Rd1

5、0h組(EA+GSRd10h組)，每組8只。MCAO組：建立大鼠 MCAO模型。EA組：造模成功后，在缺血即刻電針百會(huì)穴30min，電針參數(shù)為疏密波2/15Hz，1-2mA。GSRd6h組：造模成功后，在缺血后6h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。EA+GSRd6h組：造模成功后，在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針百會(huì)穴30min，并在缺血后6h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。GSRd8h組：造模成功后，在缺血后8h

6、給予GSRd50mg/kg腹腔注射。EA+GSRd8h組：造模成功后，在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針百會(huì)穴30min，并在缺血后8h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。GSRd10h組：造模成功后，在缺血后10h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。EA+GSRd10h組：造模成功后，在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針百會(huì)穴30min，并在缺血后10h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。神經(jīng)功能學(xué)的評(píng)分在缺

7、血再灌注后24h進(jìn)行。評(píng)分后取大鼠腦組織，通過(guò)TTC染色計(jì)算出各組大鼠腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：1）EA+GSRd6h組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯高于MCAO組(P<0.05)，腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.05)。GSRd6h組與MCAO組相比則沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2）EA+GSRd8h組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分明顯高于MCAO組(P<0.05)，腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.05)。GSRd8h組與MCAO

8、組相比則沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷，電針聯(lián)合人參皂甙Rd具有協(xié)同保護(hù)作用。電針可以延長(zhǎng)人參皂甙Rd的治療時(shí)間窗至缺血后8h。
　　實(shí)驗(yàn)二、電針聯(lián)合人參皂甙Rd的抗氧化作用的研究
　　目的：探索電針聯(lián)合人參皂甙Rd的腦保護(hù)作用是否與調(diào)控抗氧化系統(tǒng)有關(guān)。
　　方法： SPF級(jí)雄性SD大鼠60只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組)、局灶性腦缺血組(MCAO組)、電針組(EA組)、人參皂甙Rd組

9、(GSRd組)、電針聯(lián)合人參皂甙Rd組(EA+GSRd組)，每組12只。Sham組：將右側(cè)頸總、右側(cè)頸外、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈分離，但不插入線栓阻塞大腦中動(dòng)脈。MCAO組：建立大鼠MCAO模型。EA組：造模成功后，在缺血即刻電針百會(huì)穴30min，電針參數(shù)為疏密波2/15Hz，1-2mA。GSRd組：造模成功后，在缺血后8h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。EA+GSRd組：建立大鼠MCAO模型，在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針

10、百會(huì)穴30min，并在缺血后8h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。其中每組大鼠各取4只在再灌注后24h后取材提取腦組織蛋白進(jìn)行ROS試劑盒和MDA試劑盒檢測(cè)。另取4只在再灌注后24h提取組織DNA進(jìn)行8-OH-dG試劑盒檢測(cè)。每組剩余4只大鼠于再灌注后24h在深麻醉后取材，檢測(cè)SOD活力、CAT活力和GSH含量。
　　結(jié)果：1）與Sham組相比，MCAO組ROS含量、MDA的含量和8-OH-dG含量明顯升高（P<0.05），與M

11、CAO組相比，EA+GSRd組ROS含量、MDA的含量和8-OH-dG含量降低（P<0.05）。2）與Sham組相比，MCAO組SOD活性、CAT活性和GSH含量明顯下降（P<0.05），與MCAO組相比，EA+GSRd組的SOD活性、CAT活性和GSH含量升高。（P<0.05）。
　　結(jié)論：電針聯(lián)合人參皂甙Rd通過(guò)調(diào)節(jié)抗氧化系統(tǒng)，減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
　　實(shí)驗(yàn)三、電針聯(lián)合人參皂甙Rd的遠(yuǎn)期保護(hù)效應(yīng)
　　

12、目的：探索電針聯(lián)合人參皂甙Rd對(duì)腦缺血再灌注損傷的遠(yuǎn)期保護(hù)效應(yīng)。
　　方法：1）雄性SD大鼠48只，隨機(jī)分組，分為假手術(shù)組(Sham組)、局灶性腦缺血組(MCAO組)、電針聯(lián)合人參皂甙Rd組(EA+GSRd組)，每組16只。Sham組：將右側(cè)頸總、右側(cè)頸外、右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈分離，但不插入線栓阻塞大腦中動(dòng)脈。MCAO組：建立大鼠MCAO模型。EA+GSRd組：建立大鼠MCAO模型，在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針百會(huì)穴3

13、0min，并在缺血后8h給予GSRd50mg/kg腹腔注射。于再灌注后1d、3d、7d、14d每組各取4只測(cè)定體重、腦組織含水量、腦指數(shù)。2）雄性 SD大鼠16只，隨機(jī)分為局灶性腦缺血組(MCAO組)和電針聯(lián)合人參皂甙 Rd組(EA+GSRd組)，每組8只。MCAO組：建立大鼠MCAO模型。EA+GSRd組：建立大鼠MCAO模型,在缺血即刻給予疏密波2/15Hz，1-2mA電針百會(huì)穴30min，并在缺血后8h給予GSRd50mg/kg腹

14、腔注射。于再灌注后1d至7d每天測(cè)定神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分，在7d、14d進(jìn)行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分后取大鼠腦組織，通過(guò)TTC染色計(jì)算出各組大鼠腦梗死容積百分比。
　　結(jié)果：與MCAO組比較，EA+GSRd組可以促進(jìn)大鼠體重的恢復(fù)，明顯降低腦指數(shù)，減少腦組織含水量，減少腦梗死容積百分比，增加神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分。
　　結(jié)論：電針聯(lián)合人參皂甙Rd對(duì)腦缺血再灌注損傷的有較好的遠(yuǎn)期保護(hù)效應(yīng)。
　　小結(jié)
　　1.對(duì)大鼠局灶性腦缺血損傷，電針聯(lián)