桂枝茯苓湯、白藜蘆醇對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移作用的體外研究.pdf

1、宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于乳腺癌居第二位，死亡率為婦科腫瘤之首，嚴(yán)重威脅廣大婦女的生命和健康。近年來我國宮頸癌的發(fā)病率明顯上升，且發(fā)病年齡逐漸年輕化。宮頸癌的主要特點(diǎn)是局部蔓延，早期的侵襲轉(zhuǎn)移往往使患者錯(cuò)過了最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)。因此，尋找一種抗宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的藥物將會(huì)成為成功治療宮頸癌的關(guān)鍵。 中醫(yī)學(xué)把宮頸癌多歸屬“癥瘕”范疇，病位在胞宮，我們認(rèn)為病機(jī)上瘀血內(nèi)停是關(guān)鍵，故提出活血化瘀，緩消癥塊的治療大法，選用《金匱要

2、略》經(jīng)典方劑桂枝茯苓丸(桂枝、茯苓、丹皮、桃仁、芍藥)為治病方劑。關(guān)于桂枝茯苓湯的應(yīng)用研究在我國已有悠久的歷史，常用于癥結(jié)腫塊的治療，在治療惡性腫瘤方面可能發(fā)揮著更重大的作用。近幾年，白藜蘆醇作為一種天然植物抗毒素，在防治腫瘤方面也顯示出巨大潛力。研究表明，白藜蘆醇具有抗炎、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化、雌激素樣、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能。但兩者的抗腫瘤作用的機(jī)理均尚未明析，尤其對(duì)抗宮頸腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究更屬空白。 研究目的：

3、 本實(shí)驗(yàn)從基因水平、蛋白水平以及細(xì)胞形態(tài)學(xué)等方面觀察桂枝茯苓湯、白藜蘆醇、桂枝茯苓湯合白藜蘆醇對(duì)體外培養(yǎng)的宮頸癌HeLa細(xì)胞生長抑制情況、侵襲能力情況、基因蛋白及酶表達(dá)活性情況，從而探討桂枝茯苓湯、白藜蘆醇抑制宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，摸索其合理的用藥濃度，并觀察桂枝茯苓湯與白藜蘆醇聯(lián)合用藥后宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的改變情況，將用藥物的濃度和治療效果達(dá)到最佳，起到“減毒增效”作用，為宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的藥物治療提供新的策略。

4、 材料與方法： 1.應(yīng)用不同濃度的桂枝茯苓湯、白藜蘆醇、桂枝茯苓湯合白藜蘆醇分別作用于宮頸癌HeLa細(xì)胞，采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的生長抑制情況，計(jì)算出藥物的半量抑制濃度(IC50)。根據(jù)細(xì)胞生長的抑制情況聯(lián)合藥物的IC50值，我們將對(duì)細(xì)胞增殖影響較小的藥物濃度作為后續(xù)檢測(cè)藥物對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)藥物濃度。 2.經(jīng)桂枝茯苓湯、白藜蘆醇、桂枝茯苓湯合白藜蘆醇分別處理HeLa細(xì)胞24h后，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢

5、測(cè)宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的改變情況，RT-PCR、Westernblot及酶譜法分別檢測(cè)與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2mRNA、蛋白及酶表達(dá)活性的改變情況，計(jì)算MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-2值，探討基質(zhì)金屬蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑及兩者之間的平衡關(guān)系與宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。 結(jié)果： 1.桂枝茯苓湯、白藜蘆醇對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞體外生長具有明顯的抑

6、制作用，在任一濃度的桂枝茯苓湯和白藜蘆醇合用后抑制率均明顯高于單獨(dú)用藥組，并且分別隨著兩藥濃度的增加而增加。 2.桂枝茯苓湯、白藜蘆醇單藥組在對(duì)細(xì)胞增殖影響較小的情況下時(shí)，能夠在基因、蛋白及酶表達(dá)活性水平上明顯抑制與腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑的表達(dá)，明顯降低MMP-2/TIMP-1、MMP-9/TIMP-2值，恢復(fù)基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑之間的平衡狀態(tài)，降低基質(zhì)金屬蛋白酶對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解能力，從而有