白藜蘆醇抑制甲狀腺未分化癌細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:甲狀腺癌作為女性內(nèi)分泌系統(tǒng)第二高發(fā)的惡性腫瘤，其發(fā)病率逐年增高。甲狀腺未分化癌(anaplastic thyroid carcinoma, ATC)，作為甲狀腺癌幾種病理類型中惡性程度最高的一種，盡管近年來隨著腫瘤治療領(lǐng)域的不斷發(fā)展，但是在過去的50年以來，ATC的中位生存率并沒有得到提高。因此，尋找創(chuàng)新并且有效的治療方法或藥物顯得尤為迫切。白藜蘆醇(Resveratrol，RSV)，來源于葡萄等植物中的一個(gè)天然化合物，被報(bào)道在抗

2、炎癥，抗衰老，抗氧化，抗腫瘤等領(lǐng)域起作用，但關(guān)于其在甲狀腺未分化癌的作用尚不明確。因此在我們的研究中，我們考察了白藜蘆醇對于甲狀腺未分化癌的增殖的影響，并進(jìn)一步考察了白藜蘆醇對甲狀腺未分化癌再分化標(biāo)志物TTF2，PAX8的表達(dá)的影響，并研究了可能的機(jī)制。
　　研究方法:在我們的研究中，我們利用甲狀腺未分化癌細(xì)胞FRO，考察了白藜蘆醇對其增殖作用的影響，通過流式分析白藜蘆醇對其細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響，并考察了其對相關(guān)蛋白的表達(dá)量變

3、化。另一方面，我們考察了白藜蘆醇對甲狀腺未分化癌再分化標(biāo)志物TTF2，PAX8的表達(dá)的影響，并研究了可能的機(jī)制。
　　結(jié)果:1.白藜蘆醇對FRO的抑制作用呈劑量-時(shí)間依賴性，且RSV對FRO細(xì)胞的IC50為79.96μmol/L。接著，我們考察了白藜蘆醇抑制FRO的可能機(jī)制。白藜蘆醇處理48小時(shí)后，降低了蛋白PCNA和CyclinD1的蛋白表達(dá)量。另外，我們同時(shí)通過流式被檢測了RSV（0-120μmol/L）處理24h后細(xì)胞周期的

4、變化情況，結(jié)果顯示細(xì)胞周期S期的積聚，G0-G1和G2-M的減少，除此之外，G2/G1的比值也降低了。與對照組相比，在RSV120μmol/L處理的情況下，處于S期的細(xì)胞平均百分比由43.13％增加到70.17％。接著我們檢測了發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡相關(guān)的蛋白cleaved-PARP，cleaved-caspase3都增高了。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，抗凋亡蛋白BCL-2降低。除此之外，為了定量凋亡細(xì)胞，我們利用PI/FITC染色檢測凋亡細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，隨著RSV劑量

5、的增加，凋亡細(xì)胞逐漸增多。2.白藜蘆醇處理后增加甲狀腺癌再分化標(biāo)志物TTF2，PAX8的表達(dá)。3.接下來我們發(fā)現(xiàn)，RSV可以抑制β-catenin的蛋白表達(dá)，于是我們繼續(xù)檢測Wnt/β-catenin信號通路的其他蛋白，GSK-3β，pGSK-3β，CyclinD1的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)，隨著RSV濃度的增加，GSK-3β蛋白表達(dá)量增加，pGSK-3β，CyclinD1的蛋白表達(dá)量降低。除此之外，利用免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)，RSV處理后，β-cate

6、nin在細(xì)胞核的聚集降低，而在細(xì)胞質(zhì)的表達(dá)有增強(qiáng)。4.我們檢測發(fā)現(xiàn)，SB處理后，TTF2，PAX8的表達(dá)降低。緊接著，我們對于SB處理后ATC細(xì)胞，繼續(xù)加入不同濃度梯度的RSV，發(fā)現(xiàn)，隨著RSV濃度的逐漸提高，TTF2.PAX8的表達(dá)量又開始逐漸增多。
　　結(jié)論:RSV能夠通過細(xì)胞周期和促進(jìn)凋亡的方式抑制甲狀腺未分化癌細(xì)胞的增殖。另一方面，白藜蘆醇能夠促進(jìn)甲狀腺癌再分化標(biāo)志物TTF2，PAX8的表達(dá)，且已一種抑制Wnt/β-cat