白藜蘆醇對鼻咽癌細胞放療增敏的研究.pdf

1、目的:
　　研究白藜蘆醇(Resveratrol，RSV)對鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)細胞放射治療增敏的分子機制。為白藜蘆醇后續(xù)在臨床上的應用提供實驗基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.白藜蘆醇對鼻咽癌細胞活力和增殖的影響
　　1.1 MTT法檢測白藜蘆醇對鼻咽癌細胞活力的影響。
　　1.2不同濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細胞后用克隆形成實驗計算克隆形成率。
　　1.3不同

2、濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細胞后用流式細胞儀檢測各組細胞周期。
　　2.白藜蘆醇對鼻咽癌細胞放射治療增敏的作用
　　2.1白藜蘆醇對鼻咽癌細胞放射治療后生存率的影響，利用線性二次模型(LQ)，根據(jù)SF值制作放射敏感曲線。
　　2.2流式細胞儀檢測鼻咽癌細胞經(jīng)放射治療后細胞凋亡。
　　3.自藜蘆醇對放射增敏相關(guān)蛋白表達的影響
　　3.1免疫印跡實驗檢測白藜蘆醇作用鼻咽癌細胞放射治療后相關(guān)蛋白的表達情況。

3、　　3.2免疫印跡實驗檢測不同劑量白藜蘆醇作用鼻咽癌細胞后對相關(guān)蛋白表達的影響。
　　3.3免疫印跡實驗檢測白藜蘆醇作用鼻咽癌細胞不同時間段后對相關(guān)蛋白表達的影響。
　　3.4在鼻咽癌細胞內(nèi)利用慢病毒下調(diào)E2F1基因來研究白藜蘆醇對鼻咽癌細胞的影響。
　　3.5在鼻咽癌細胞內(nèi)利用慢病毒過表達E2F1基因來研究白藜蘆醇對鼻咽癌細胞的影響。
　　4.體內(nèi)實驗:通過裸鼠荷瘤模型研究白藜蘆醇對鼻咽癌細胞放射增敏的作用

4、r>　　結(jié)果:
　　1.白藜蘆醇對鼻咽癌細胞活力和增殖的影響
　　1.1 MTT法檢測不同濃度的白藜蘆醇作用鼻咽癌細胞后，濃度為25μ moL/L和50μmoL/L的白藜蘆醇作用24小時后對細胞活力沒有明顯影響。
　　1.2濃度為50μmoL/L的白藜蘆醇處理鼻咽癌細胞24小時后可明顯抑制細胞形成克隆的能力。
　　1.3白藜蘆醇處理細胞后，G0/G1期的細胞比例從33.40％上升到69.70％、81.68％，說明

5、白藜蘆醇能使鼻咽癌細胞阻滯在G0/G1期。
　　1.4結(jié)合上面的結(jié)果，選用濃度為50μ moL/L的白藜蘆醇，處理時間為24小時，進行后續(xù)實驗。
　　2.白藜蘆醇對鼻咽癌細胞放射治療增敏的作用
　　2.1克隆形成率隨輻照劑量加大而降低。
　　2.2白藜蘆醇聯(lián)合放射治療后提高了鼻咽癌細胞細胞凋亡率。
　　3.白藜蘆醇對放射增敏相關(guān)蛋白表達的影響
　　3.150μmoL/L的白藜蘆醇可以抑制E2F1的表達

6、，下調(diào)p-AKT，但是對p-ERK沒有影響。
　　3.2白藜蘆醇對E2F1、p-AKT的影響呈劑量效應，對p-ERK無影響。
　　3.3白藜蘆醇對E2F1、p-AKT的影響呈時間效應，對p-ERK無影響。
　　3.4利用慢病毒構(gòu)建了下調(diào)E2F1表達的的穩(wěn)定細胞系CNE-1-shE2F1及其對照株CNE-1-NC，WB檢測出E2F1的表達可明顯影響p-AKT的表達水平，但對p-ERK無影響;通過單克隆形成實驗檢測CNE-

7、1-shE2F1及其對照株CNE-1-NC的克隆形成能力觀察到CNE-1-shE2F1的克隆形成率明顯低于CNE-1-NC;流式細胞技術(shù)檢測CNE-1-shE2F1及其對照株CNE-1-NC的周期變化，結(jié)果顯示細胞周期阻滯在G0/G1期。
　　3.5利用慢病毒構(gòu)建了過表達E2F1表的的穩(wěn)定細胞系CNE-1-E2F1及其對照株CNE-1-NC，用50μ moL/L的白藜蘆醇處理后，免疫印跡實驗檢測出在CNE-1中過表達E2F1，可以

8、明顯抑制白藜蘆醇引起的p-AKT表達水平，對p-ERK無影響;克隆形成檢測結(jié)果表明，在鼻咽癌細胞中過表達E2F1可抑制白藜蘆醇引起的克隆形成率;流式細胞技術(shù)檢測細胞周期表明，在鼻咽癌細胞中過表達E2F1可抑制白藜蘆醇引起的G0/G1周期阻滯。
　　4.體內(nèi)實驗表明白藜蘆醇和放射治療聯(lián)合后其控制腫瘤體積和體重的效果非常顯著，說明白藜蘆醇可以增強鼻咽癌細胞對放射治療的敏感性。
　　結(jié)論:
　　本實驗研究結(jié)果表明，白藜蘆醇可