白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放療增敏的研究.pdf

1、目的:
　　研究白藜蘆醇(Resveratrol，RSV)對(duì)鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)細(xì)胞放射治療增敏的分子機(jī)制。為白藜蘆醇后續(xù)在臨床上的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:
　　1.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力和增殖的影響
　　1.1 MTT法檢測(cè)白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力的影響。
　　1.2不同濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細(xì)胞后用克隆形成實(shí)驗(yàn)計(jì)算克隆形成率。
　　1.3不同

2、濃度白藜蘆醇作用于鼻咽癌細(xì)胞后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期。
　　2.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療增敏的作用
　　2.1白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療后生存率的影響，利用線性二次模型(LQ)，根據(jù)SF值制作放射敏感曲線。
　　2.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)鼻咽癌細(xì)胞經(jīng)放射治療后細(xì)胞凋亡。
　　3.自藜蘆醇對(duì)放射增敏相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　3.1免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞放射治療后相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。

3、　　3.2免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同劑量白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞后對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　3.3免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞不同時(shí)間段后對(duì)相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　3.4在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)利用慢病毒下調(diào)E2F1基因來(lái)研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的影響。
　　3.5在鼻咽癌細(xì)胞內(nèi)利用慢病毒過(guò)表達(dá)E2F1基因來(lái)研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞的影響。
　　4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn):通過(guò)裸鼠荷瘤模型研究白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射增敏的作用

4、r>　　結(jié)果:
　　1.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞活力和增殖的影響
　　1.1 MTT法檢測(cè)不同濃度的白藜蘆醇作用鼻咽癌細(xì)胞后，濃度為25μ moL/L和50μmoL/L的白藜蘆醇作用24小時(shí)后對(duì)細(xì)胞活力沒有明顯影響。
　　1.2濃度為50μmoL/L的白藜蘆醇處理鼻咽癌細(xì)胞24小時(shí)后可明顯抑制細(xì)胞形成克隆的能力。
　　1.3白藜蘆醇處理細(xì)胞后，G0/G1期的細(xì)胞比例從33.40％上升到69.70％、81.68％，說(shuō)明

5、白藜蘆醇能使鼻咽癌細(xì)胞阻滯在G0/G1期。
　　1.4結(jié)合上面的結(jié)果，選用濃度為50μ moL/L的白藜蘆醇，處理時(shí)間為24小時(shí)，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.白藜蘆醇對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射治療增敏的作用
　　2.1克隆形成率隨輻照劑量加大而降低。
　　2.2白藜蘆醇聯(lián)合放射治療后提高了鼻咽癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡率。
　　3.白藜蘆醇對(duì)放射增敏相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　3.150μmoL/L的白藜蘆醇可以抑制E2F1的表達(dá)

6、，下調(diào)p-AKT，但是對(duì)p-ERK沒有影響。
　　3.2白藜蘆醇對(duì)E2F1、p-AKT的影響呈劑量效應(yīng)，對(duì)p-ERK無(wú)影響。
　　3.3白藜蘆醇對(duì)E2F1、p-AKT的影響呈時(shí)間效應(yīng)，對(duì)p-ERK無(wú)影響。
　　3.4利用慢病毒構(gòu)建了下調(diào)E2F1表達(dá)的的穩(wěn)定細(xì)胞系CNE-1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC，WB檢測(cè)出E2F1的表達(dá)可明顯影響p-AKT的表達(dá)水平，但對(duì)p-ERK無(wú)影響;通過(guò)單克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CNE-

7、1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC的克隆形成能力觀察到CNE-1-shE2F1的克隆形成率明顯低于CNE-1-NC;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CNE-1-shE2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC的周期變化，結(jié)果顯示細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。
　　3.5利用慢病毒構(gòu)建了過(guò)表達(dá)E2F1表的的穩(wěn)定細(xì)胞系CNE-1-E2F1及其對(duì)照株CNE-1-NC，用50μ moL/L的白藜蘆醇處理后，免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出在CNE-1中過(guò)表達(dá)E2F1，可以

8、明顯抑制白藜蘆醇引起的p-AKT表達(dá)水平，對(duì)p-ERK無(wú)影響;克隆形成檢測(cè)結(jié)果表明，在鼻咽癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)E2F1可抑制白藜蘆醇引起的克隆形成率;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期表明，在鼻咽癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)E2F1可抑制白藜蘆醇引起的G0/G1周期阻滯。
　　4.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明白藜蘆醇和放射治療聯(lián)合后其控制腫瘤體積和體重的效果非常顯著，說(shuō)明白藜蘆醇可以增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性。
　　結(jié)論:
　　本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，白藜蘆醇可