ARHI在宮頸癌中的表達(dá)特點(diǎn)及白藜蘆醇對(duì)其調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的:宮頸癌(Cervical Cancer)是目前為止在全球范圍最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一,位居女性癌癥相關(guān)死亡原因第二位,其發(fā)病率僅次于乳腺癌,是發(fā)展中國(guó)家女性的主要死亡原因之一。而且更為嚴(yán)重的是,宮頸癌的發(fā)病率在全世界的范圍內(nèi)有明顯的上升趨勢(shì),并且發(fā)病年齡趨于年輕化,所以該疾病一直受到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的高度重視。截至目前,大部分患者仍然是選擇手術(shù)來(lái)治療宮頸癌,但是該疾病極易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)?，F(xiàn)在的治療方案多是采取手術(shù)聯(lián)合化療的方法,但是由

2、于臨床上常用的化療藥物有很強(qiáng)的毒副作用并且耐藥現(xiàn)象也是時(shí)有發(fā)生,嚴(yán)重的影響了患者的生活質(zhì)量。綜上所述,尋找一種更加可靠并且毒副作用較小的藥物,有著十分重要的臨床意義和價(jià)值。
　　白藜蘆醇(Resveratrol,Res)是一種廣泛存在于植物和草藥中的多酚類(lèi)化合物,例如花生、葡萄皮等,在多方面發(fā)揮著其有利的生物學(xué)效應(yīng),主要包括抗炎、抗氧化、心血管保護(hù)、預(yù)防和抑制腫瘤等作用。以往的研究已發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可以誘導(dǎo)包括白血病、肝癌、乳腺癌、卵

3、巢癌、前列腺癌、喉癌等多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡,由此可見(jiàn),在腫瘤的預(yù)防和治療方面白藜蘆醇有著重要的藥用價(jià)值,所以探討一下白藜蘆醇在宮頸癌中的調(diào)節(jié)作用顯得尤為重要。
　　ARHI基因是從人卵巢和乳腺上皮細(xì)胞及其癌細(xì)胞中克隆出的一個(gè)腫瘤相關(guān)基因。該基因中包括了三個(gè)CpG島,它的異常甲基化對(duì)該基因的表達(dá)產(chǎn)生影響。AHRI基因是一個(gè)印記基因,正常細(xì)胞中,母源性的ARHI等位基因上發(fā)生CpG島甲基化修飾,使其轉(zhuǎn)錄活性受到抑制,而父源性的等位基因

4、則無(wú)甲基化修飾,從而能夠在子代中表達(dá)。Beclin是酵母ATG6/Vps30在哺乳動(dòng)物中的同源基因,在自噬泡形成過(guò)程中發(fā)揮重要的作用。MAPLC3是哺乳動(dòng)物細(xì)胞中酵母ATG8基因的同源物,定位在自噬體膜上,參與自噬體的形成,特異的反映細(xì)胞內(nèi)自噬體的數(shù)量,現(xiàn)已作為自噬體的特異性標(biāo)記蛋白,被認(rèn)為是比較特異的自噬診斷指標(biāo)。以往的研究已經(jīng)表明,ARHI基因在多種癌癥中表達(dá)下調(diào),如乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和其他一些癌癥中,但在宮頸癌組織(包括癌旁正

5、常組織)和宮頸癌細(xì)胞系中對(duì)ARHI的表達(dá)的研究較少,所以本課題組的研究目的是觀察一下ARHI基因在正常宮頸組織、宮頸癌組織以及三個(gè)不同的宮頸癌細(xì)胞系中的表達(dá)特點(diǎn),以及白藜蘆醇對(duì)其處理后產(chǎn)生了怎樣的變化,并且這種變化和自噬的相關(guān)性分析,旨在為ARHI基因是否可以作為宮頸癌新的基因治療的靶點(diǎn)提供更多的理論基礎(chǔ),并且為白藜蘆醇在臨床應(yīng)用方面的價(jià)值提供更多的依據(jù)。
　　方法:81例人宮頸癌及正常宮頸組織的石蠟標(biāo)本由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院

6、提供。宮頸腺癌細(xì)胞系HeLa和宮頸鱗癌細(xì)胞系SiHa和C33A均購(gòu)于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。本實(shí)驗(yàn)研究基于石蠟組織微陣列技術(shù),利用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)、臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光、RT-PCR、Western-blot蛋白印跡分析等方法,檢測(cè)白藜蘆醇處理前后三個(gè)宮頸癌細(xì)胞系中相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:1)免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,在鱗狀上皮、鱗癌、腺上皮、腺癌這四種組織中,ARH

7、I的陽(yáng)性表達(dá)率分別是44.4％、85.7％、68.4％、81.3％,在大鼠宮頸中ARHI的陽(yáng)性表達(dá)率是16.7％,統(tǒng)計(jì)分析P＜0.01;2)鱗狀上皮和鱗癌組與HPV16表達(dá)呈正相關(guān),鱗癌、腺上皮和腺癌組與廣譜HPV表達(dá)呈正相關(guān);3)分別用白藜蘆醇和順鉑處理HeLa、SiHa和C33A細(xì)胞48小時(shí)后,均觀察到細(xì)胞數(shù)量減少和細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,并且兩種藥物對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用無(wú)顯著的差異(P＞0.05);4)免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光染色顯示,在白藜

8、蘆醇處理后的宮頸癌HeLa、SiHa和C33A細(xì)胞內(nèi)ARHI表達(dá)出現(xiàn)下調(diào),上述現(xiàn)象通過(guò)Western-blotting和RT-PCR檢測(cè)結(jié)果得到證實(shí);5)免疫熒光和免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果亦顯示,自噬相關(guān)蛋白Beclin和LC3在白藜蘆醇處理后的宮頸癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào);6)Western-blotting檢測(cè)結(jié)果表明,白藜蘆醇能促進(jìn)Beclin表達(dá)和LC3Ⅰ向LC3Ⅱ轉(zhuǎn)換。
　　結(jié)論:1)白藜蘆醇具有與一線抗宮頸癌化療藥順鉑相似的抑癌作