地塞米松、來(lái)曲唑促排卵作用的基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、自1978年世界上第一例“試管嬰兒”誕生以來(lái)，人類(lèi)輔助生殖技術(shù)有了很大進(jìn)步與發(fā)展，技術(shù)日臻成熟，成功率也逐步提高。適宜的控制性超促排卵技術(shù)使絕大多數(shù)患者獲得足夠多的卵子數(shù)，從而有更多的可供移植胚胎，增加了臨床妊娠率。但在COH過(guò)程中仍存在很多問(wèn)題，如雌激素水平低、卵泡發(fā)育速度慢、子宮內(nèi)膜與卵泡發(fā)育不同步等?；诖萍に睾铣傻膬煞N細(xì)胞兩種促性腺激素學(xué)說(shuō)，針對(duì)COH過(guò)程中雌激素水平低的情況，臨床醫(yī)生通過(guò)加入黃體生成素來(lái)增加合成雌激素的底物--

2、睪酮和雄烯二酮。但LH并不能改善所有雌激素水平低患者的狀況，于是近年有學(xué)者致力從另一條途徑尋找能提高雌激素水平的方法。 促排卵是輔助生殖技術(shù)中首要而關(guān)鍵的一步。現(xiàn)臨床上用于促排卵的藥物主要包括兩種，一種是口服的克羅米酚；另一種是可注射的促性腺激素類(lèi)藥物，主要是重組的促卵泡生成激素(r-FSH)，然而這些藥物在促排卵的同時(shí)卻帶來(lái)了一些副作用。近來(lái)國(guó)內(nèi)外許多研究報(bào)道，治療雌激素依賴性疾病的芳香化酶抑制劑一來(lái)曲唑可作為生育調(diào)節(jié)劑用于

3、促進(jìn)人和動(dòng)物模型卵泡的發(fā)育，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其副作用小、促排卵效果好。其促排卵作用己引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。 芳香化酶抑制劑最初用于雌激素依賴性疾病如乳腺癌、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥的治療。近年來(lái)由于其特殊的作用機(jī)制及優(yōu)越性逐漸用于不孕患者的促排卵治療。有研究表明，第三代芳香化酶抑制劑來(lái)曲唑可明顯降低體外子宮肌瘤細(xì)胞培養(yǎng)液中雌二醇的水平，但關(guān)于來(lái)曲唑?qū)w外培養(yǎng)的人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌二醇的影響的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。 本研究擬以雌激素產(chǎn)生

4、過(guò)程中的芳香化酶活性為中心，分別探討：①在動(dòng)物和人體多種細(xì)胞中證實(shí)有上調(diào)芳香化酶活性的地塞米松，是否也具有上調(diào)人類(lèi)卵巢顆粒細(xì)胞芳香化酶活性、促進(jìn)E2分泌的作用?這將為其今后的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。②具有下調(diào)芳香化酶活性的來(lái)曲唑?qū)θ寺殉差w粒細(xì)胞的直接作用如何。 第一章地塞米松及來(lái)曲唑?qū)w外人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌激素的影響 目的： 1.探討地塞米松對(duì)體外人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌激素的影響。 2.探討地塞米松聯(lián)合來(lái)曲

5、唑?qū)w外人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌激素的影響。 方法： 1.標(biāo)本來(lái)源和分組： 1)標(biāo)本來(lái)源：卵巢顆粒細(xì)胞標(biāo)本來(lái)自南方醫(yī)院生殖中心2007年8月至2007年12月之間接受體外受精-胚胎移植的10例不孕女性患者。病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：年齡≤35歲，平均年齡30.3±2.54歲；盆腔卵管因素性不孕或男性因素不孕；行常規(guī)IVF-ET或單精子卵細(xì)胞漿內(nèi)注射治療；留取患者取卵日卵泡液提取顆粒細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。 2)分組：根據(jù)加入地塞米

6、松濃度不同將每位患者的顆粒細(xì)胞分為5組，空白對(duì)照組，10-7mol/L組，10-5mol/L組，10-3mol/L組，10-5mol/L地塞米松+10-5mol/L來(lái)曲唑組。 2.觀察指標(biāo)及實(shí)驗(yàn)方法：以雌二醇水平為指標(biāo)，采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法t所有數(shù)據(jù)應(yīng)用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用One-wayANOVA方差分析。 結(jié)果：

7、 1.在人卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中加入不同濃度的地塞米松處理液后，發(fā)現(xiàn)地塞米松組雌激素水平高于空白對(duì)照組，并且隨著地塞米松濃度遞增雌二醇水平逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.采用LSD方法進(jìn)行多重比較，10-7mol/L地塞米松組的E2水平高于空白對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；10-5mol/L組E2水平為(135.77±10.30)pg/ml，10-3mol/L組(141.42±10.58)pg/ml，顯著高于空白對(duì)照組

8、(119.6±13.84)pg/ml；10-7mol/L組與10-5mol/L組，10-7mol/L組與10-3mol/L之間均有顯著性差異；10-5mol/L組與10-3mol/L組之間無(wú)顯著性差異(P=0.278)。 3.在培養(yǎng)液中同時(shí)加入濃度均為10-5mol/L地塞米松和來(lái)曲唑，其上清液E2水平(117.15±13.55)pg/ml，稍低于空白對(duì)照組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 小結(jié)： 1.在人卵巢顆粒細(xì)胞體外

9、培養(yǎng)體系中加入地塞米松后，E2水平升高，提示地塞米松能促進(jìn)雌激素的合成，這可能是通過(guò)增強(qiáng)芳香化酶活性完成的，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 2.地塞米松聯(lián)合來(lái)曲唑作用于顆粒細(xì)胞后，E2水平變化不顯著，提示地塞米松可能通過(guò)增強(qiáng)芳香化酶活性拮抗了來(lái)曲唑下調(diào)芳香化酶活性的效應(yīng)。 第二章地塞米松在控制性超促排卵中的臨床應(yīng)用 目的：比較地塞米松和人絕經(jīng)期促性腺激素在用于控制性超促排卵過(guò)程中E2水平低患者的效果。 方法：

10、 1.標(biāo)本來(lái)源和分組： 1)標(biāo)本來(lái)源：研究對(duì)象為2007年7月至2008年1月就診于南方醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心因“盆腔卵管因素性不孕或男性因素不孕”行IVF-ET治療的女性不孕患者。 2)分組：將注射促性腺激素后5天卵泡發(fā)育不理想、E2水平低的32例患者隨機(jī)分為兩組，分別在注射Gn的同時(shí)服用地塞米松和注射人絕經(jīng)期促性腺激素，均用藥至注射人絨毛膜促性腺激素(hCG)日。用藥當(dāng)天及hCG日抽血測(cè)血清E2水平。B超監(jiān)測(cè)卵泡及

11、子宮內(nèi)膜發(fā)育情況。 2.實(shí)驗(yàn)指標(biāo)及檢測(cè)方法：以血清E2水平、子宮內(nèi)膜厚度、用藥天數(shù)為指標(biāo)；E2水平采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定，子宮內(nèi)膜厚度經(jīng)B超監(jiān)測(cè)。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)應(yīng)用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。 結(jié)果： 1.Dex組患者年齡(29.94±4.40)歲，hMG組年齡(32.19±4.03)歲，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)

12、學(xué)意義，具有可比性。 2.將兩組患者用藥前后血清雌激素水平的變化的差值進(jìn)行比較：Dex組血清E2的增加顯著高于hMG組(2696.64±1630.91vs.1680.76±1040.02)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 3.將兩組用藥前后的子宮內(nèi)膜厚度變化的差值及用藥天數(shù)進(jìn)行比較，Oex組子宮內(nèi)膜厚度增加值大于hMG組(6.06±2.54vs.4.92±1.23)mm，但無(wú)顯著性差異；Dex組平均用藥天數(shù)多于hMG組(8

13、.81±3.10，vs.7.00±2.31)天，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 小結(jié)： 1.分別給予COH過(guò)程中E2水平低的患者Dex和hMG，Dex較hMG更多地促進(jìn)E2合成。提示：芳香化酶在雌激素合成過(guò)程中起重要作用。 2.地塞米松組E2水平的增加顯著高于hMG組，但子宮內(nèi)膜厚度并沒(méi)有顯著增長(zhǎng)，提示：在誘導(dǎo)排卵周期，E2濃度超過(guò)一定值后與子宮內(nèi)膜厚度無(wú)正相關(guān)。 第三章來(lái)曲唑?qū)w外人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌激素的影響

14、 目的：探討來(lái)曲唑?qū)w外培養(yǎng)的人卵巢顆粒細(xì)胞分泌雌激素的影響。 方法： 1.標(biāo)本來(lái)源和分組： 1)標(biāo)本來(lái)源：卵巢顆粒細(xì)胞標(biāo)本來(lái)自南方醫(yī)院生殖中心2007年8月至2007年12月之間接受體外受精-胚胎移植的30例不孕女性患者。病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：年齡≤35歲，平均年齡28.67±3.24歲；盆腔卵管因素性不孕或男性因素不孕：行常規(guī)IVF-ET/ICSI治療；留取患者取卵日卵泡液提取顆粒細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。 2)分

15、組：根據(jù)加入來(lái)曲唑濃度不同將每位患者的顆粒細(xì)胞分為四組，空白對(duì)照組，10-5mol/L組，10-7mol/L組，10-9mol/L組。 2.觀察指標(biāo)及實(shí)驗(yàn)方法：以雌二醇水平為指標(biāo)，采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行測(cè)定。 3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有數(shù)據(jù)應(yīng)用spss11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用One-wayANOVA方差分析。 結(jié)果： 1.在人卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系

16、中加入不同濃度(10-5mol/L，10-7mol/L，10-9mol/L)的來(lái)曲唑，發(fā)現(xiàn)來(lái)曲唑組E2水平顯著低于空白對(duì)照組(68.83±10.67，85.03±12.19，112.00±14.96vs.122.39±15.45)pg/ml，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.10-5mol/L組、10-7mol/L組和10-9mol/L組雌二醇水平顯著低于對(duì)照組(P<0.01)：且隨著來(lái)曲唑濃度遞增雌二醇水平逐漸降低。 小結(jié)：

17、 1.在顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中加入來(lái)曲唑后，E2水平降低，提示芳香化酶抑制劑來(lái)曲唑能減少雌激素的合成。 2.隨著來(lái)曲唑濃度的升高，E2水平逐漸降低，提示雌激素的合成可能對(duì)來(lái)曲唑有濃度依賴性。 全文小結(jié) 1、在人卵巢顆粒細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中加入地塞米松，E2水平升高，提示地塞米松能促進(jìn)雌激素的合成，這可能是通過(guò)增強(qiáng)芳香化酶活性完成的，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 2、地塞米松聯(lián)合來(lái)曲唑作用于顆粒細(xì)胞后，E2