重型胰腺炎大鼠體內(nèi)Ghrelin及其受體的表達以及丹參干預(yù)作用的機理研究.pdf

1、目的：建立大鼠重型胰腺炎(SAP)動物模型，證實模型成功，觀察重型胰腺炎(SAP)動物模型血清及胰腺組織內(nèi)Ghrelin和GHSR變化以及丹參對其影響作用，探討活血化瘀中藥治療重型胰腺炎的機理。 方法：將48只Wistar大鼠分為兩個實驗組：SAP模型組和假手術(shù)對照組，各24只。SAP模型組采用逆行胰膽管注入牛黃膽酸鈉的方法建立，使用一次性靜脈留置套管針及微量注射泵以恒定的壓力和速度經(jīng)十二指腸向膽胰管內(nèi)注射牛磺膽酸鈉以誘發(fā)大鼠S

2、AP形成，假手術(shù)對照組以相同方法向膽胰管內(nèi)注射去離子水。術(shù)后均給予生理鹽水(NS)注射液補液治療。每組再分為3h、6h、12h、24h四個觀察亞組，每亞組6只，于術(shù)后相應(yīng)時點麻醉下留取血樣本后處死，留取胰腺、測定大鼠血清淀粉酶、TNF-α、IL-6胰腺的大體及鏡下病理組織學(xué)變化來確定SAP的形成。將72只Wistar大鼠隨機分為：假手術(shù)對照組、胰腺炎模型組及丹參治療組各24只。每組再分為3h、6h、12h、24h四個觀察亞組，每亞組6只

3、。假手術(shù)對照組逆行胰膽管注入去離子水的方法建立，胰腺炎模型組采用逆行胰膽管注入牛黃膽酸鈉的方法建立，丹參治療組于建立大鼠SAP模型后馬上腹腔內(nèi)注入丹參注射液，其余各組給予等量生理鹽水。術(shù)后于相應(yīng)時點，麻醉下留取血樣本后處死，留取胰腺。測定血清Ghrelin，并通過RT-PCR測定胰腺組織內(nèi)GhrelinmRNA、GHSRmRNA，westernblot測定胰腺組織內(nèi)Ghrelin、GHSR蛋白表達。 結(jié)果：①SAP模型組胰腺組織

4、結(jié)構(gòu)明顯破壞，病理評分明顯高于假手術(shù)對照組(P<0.05)。與假手術(shù)對照組相比，SAP模型組血清TNF-α在3h、6h、12h均較假手術(shù)對照組升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，24h下降至假手術(shù)對照組水平。SAP模型組血清IL-6在3h，6h、12h及24h均較假手術(shù)對照組明顯升高有，統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。SAP模型組血清淀粉酶較假手術(shù)對照組高，有統(tǒng)計學(xué)意義。②丹參治療組血清Ghrelin要明顯高于假手術(shù)對照組及胰腺炎模型組水平

5、，且隨時間呈下降趨勢，在24h亞組接近胰腺炎模型組24h亞組水平。血清水平Ghrelin濃度變化假手術(shù)對照組、胰腺炎模型組及丹參治療組相互在總體上均有統(tǒng)計學(xué)上差異(p<0.05)。GhrelinmRNA在胰腺組織內(nèi)表達，其中胰腺炎模型組與丹參治療組均明顯高于假手術(shù)對照組，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；丹參治療組明顯高于胰腺炎模型組且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；其中假手術(shù)組內(nèi)GhrelinmRNA表達各亞組間無明顯變化，胰腺炎模型組與

6、丹參治療組亞組間GhrelinmRNA表達呈逐漸增高趨勢，3h亞組與12h亞組和24h亞組之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。本研究結(jié)果顯示，Ghrelin蛋白在胰腺組織內(nèi)表達，其中胰腺炎模型組與丹參治療組均明顯高于假手術(shù)對照組，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；丹參治療組Ghrelin蛋白表達明顯高于胰腺炎模型組且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中假手術(shù)組內(nèi)Ghrelin蛋白表達各亞組間無明顯變化，胰腺炎模型組與丹參治療組亞組間Ghr

7、elin蛋白表達呈逐漸增高趨勢，但3h和6h亞組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。③GHSRmRNA在胰腺組織內(nèi)表達，其中胰腺炎模型組與丹參治療組均明顯高于假手術(shù)對照組，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；丹參治療組明顯高于胰腺炎模型組且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；其中假手術(shù)組內(nèi)GHSRmRNA表達各亞組間無明顯變化，胰腺炎模型組與丹參治療組亞組間GHSRmRNA表達呈逐漸增高趨勢，3h亞組與6h亞組無統(tǒng)計學(xué)差異，但兩者均與12h亞組和24h亞組之間差

8、別有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。本研究結(jié)果顯示，GHSR蛋白在胰腺組織內(nèi)表達，其中胰腺炎模型組與丹參治療組均明顯高于假手術(shù)對照組，且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.00)；丹參治療組GHSR蛋白表達明顯高于胰腺炎模型組且有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；其中假手術(shù)組內(nèi)GHSR蛋白表達各亞組間無明顯變化，胰腺炎模型組與丹參治療組亞組間GHSR蛋白表達呈逐漸增高趨勢，但3h和6h亞組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異兩者均與12h亞組和24h亞組之間差別有統(tǒng)計學(xué)意義(p

9、<0.05)。 結(jié)論：①本方法誘發(fā)的大鼠SAP模型，經(jīng)半定量病理檢查，確認此SAP動物模型存在明顯胰腺病理損害，大鼠血清淀粉酶、TNF-α、IL-6胰腺炎模型組明顯高于假手術(shù)對照組，認為SAP模型造模成功。②丹參作用下重型胰腺炎大鼠血清及胰腺組織內(nèi)Ghrelin含量明顯增加，胰腺組織內(nèi)GhrelinmRNA表達逐漸升高。丹參通過增加Ghrelin含量，發(fā)揮Ghrelin抑制炎癥反應(yīng)的作用，來治療胰腺炎的。③丹參作用下重型胰腺炎大