用抑制性差減雜交篩選Kaposi肉瘤相關(guān)基因.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、　　本研究旨在篩選KS腫瘤組織與正常皮膚組織間差異表達基因，建立KS差異基因cDNA文庫，從分子水平探討KS發(fā)病機制。采集1例典型KS患者新鮮KS腫瘤組織，同時選取該患者完全正常的皮膚組織作為對照，抽提總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成雙鏈cDNA(dscDNA)，經(jīng)RsaI酶切后，分別以正常組織和腫瘤組織作為tester和driver，進行雙向抑制性差減雜交(Suppressionsubtractivehybridization，SSH)，篩選KS

2、腫瘤組織與正常皮膚組織間差異表達基因，將差異基因PCR擴增，與PGEM-Teasy克隆載體連接，轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌，構(gòu)建差異基因文庫。采用藍白斑篩選，獲得白色陽性克隆菌落，煮沸破菌，PCR擴增出未知基因片段作進一步篩選。采用Blastn、Blastx與Genebank進行同源性比較。 研究結(jié)論：經(jīng)雙向抑制性差減雜交初步篩選了KS差異表達基因，獲取了KS差異表達基因文庫。并通過測序發(fā)現(xiàn)，過表達的抗原CD164可能通過粘附作用、促

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