乳腺癌細胞增殖與凋亡相關(guān)microRNA的篩選.pdf

1、腫瘤是難以治愈的疾病。目前對腫瘤的治療主要是通過外科手術(shù)切除，以及放療或化療等方法，但目前尚無法根治。乳腺癌是一種女性常見的腫瘤，在惡性腫瘤女性患者中，乳腺癌的發(fā)病率高居第一。目前已有越來越多的研究發(fā)現(xiàn)癌基因在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起著非常重要的作用，它們可能調(diào)控著癌細胞的增殖、遷移或凋亡。微小RNA(microRNA)是一類單鏈小分子非編碼RNA，長度約22個核苷酸，廣泛存在于真核生物中，主要通過與靶mRNA3'非翻譯區(qū)完全或部分互補結(jié)

2、合，導(dǎo)致靶mRNA降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯抑制，從而調(diào)控靶基因的表達。鑒定能夠?qū)θ橄侔╆P(guān)鍵癌基因起調(diào)控作用的microRNA，對乳腺癌的治療有著重要的作用。
　　 本研究以人乳腺癌細胞系MCF-7為研究系統(tǒng)，利用慢病毒(lentivirus)介導(dǎo)的真核細胞表達系統(tǒng)過表達特定miRNA，檢測對MCF-7細胞系的增殖具有抑制作用的microRNA。實驗主要分為4個部分:
　　 1.在miRanda、miRDB、PicTar和Targ

3、etScan4個microRNA靶基因預(yù)測軟件上分別進行了靶預(yù)測，選擇靶基因中富集了參與調(diào)控細胞增殖和細胞生長的miRNA。最后找到miR-124、miR-181a-1、miR-211、miR-302a、miR-302b、miR-302c及miR-367這7個microRNA作為候選microRNA。
　　 2.根據(jù)miRBase數(shù)據(jù)庫中的人microRNA前體序列，合成互補的兩條序列片段，將兩條鏈退火后，酶聯(lián)到pLVX-shR