抗腫瘤藥物2-ME納米干混懸劑的研究.pdf

1、2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol,2-ME),作為雌二醇的內(nèi)源性代謝物,因其具有廣譜抗腫瘤活性,且毒性較低,近年來被廣泛關(guān)注,口服膠囊已被FDA批準(zhǔn)進(jìn)行二期臨床研究。2-ME在水中難溶,半衰期短,體內(nèi)又易快速羥基化、脫氫而形成非活性代謝物,且存在明顯的肝首過效應(yīng),難以維持有效血藥濃度,致使其口服生物利用度較低,同時(shí)Ⅰ期臨床結(jié)果表明其口服吸收無規(guī)律,藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與劑量之間缺乏相關(guān)性。為了解決2-ME水中難溶、肝首過

2、效應(yīng)及生物利用度低的問題,結(jié)合納米混懸劑這種新型給藥系統(tǒng)的特點(diǎn),本文采用納米沉淀-超聲粉碎法制備2-ME納米混懸液,從體內(nèi)、體外對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)地研究和探討,以期為2-ME的開發(fā)和臨床應(yīng)用提供更多借鑒,現(xiàn)將本文的主要研究內(nèi)容摘要如下:
　　 1.2-ME納米干混懸劑的制備和表征。采用納米沉淀-超聲粉碎法制備2-ME納米混懸液,冷凍干燥后所得粉末可成功地提高藥物的溶出速度,在最初的10min內(nèi),其溶出速率是2-ME原料藥的45倍以上

3、,體外溶出速率的增加將有利于藥物生物利用度的提高。制備的納米混懸劑以粒徑和電位為評(píng)價(jià)指標(biāo),用掃描電鏡、差示掃描量熱法及X射線衍射法進(jìn)行了表征。結(jié)果表明,2-ME納米干混懸劑呈無定形粉末狀,復(fù)溶后平均粒徑(244.5±5.8)nm(PDI0.23±0.02),電位(-34.4±2.2)mV,物理穩(wěn)定性研究顯示,4℃放置6個(gè)月后粒徑和藥物含量均未見明顯變化。
　　 2.2-ME納米混懸液大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)和組織分布研究。以SD大鼠為試驗(yàn)

4、對(duì)象,通過尾靜脈注射給藥(10mg/kg),采用HPLC法測定不同時(shí)間點(diǎn)大鼠血漿及各組織中的藥物濃度,以此評(píng)價(jià)2-ME納米混懸液(正電荷、中性和負(fù)電荷)和2-ME普通溶液的體內(nèi)行為。結(jié)果表明2-ME制成納米混懸液后,其體內(nèi)行為發(fā)生改變。2-ME-N(2-ME納米混懸液,荷負(fù)電)的T1/2α、T1/2β和V(c)分別是2-ME-S(2-ME溶液)的1.67、2.23和3.18倍,具有一定的緩釋效果。負(fù)電荷2-ME-N相比于正電荷2-ME-

5、N具有較高的T1/2α、T1/2β和V(c),但二者AUC之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。體內(nèi)分布結(jié)果表明,中性2-ME-N在脾、心和肝中分布較多,腎中分布最少,沒有明顯的靶器官;正電荷2-ME-N在脾中的濃度最高,脾的總靶效率為51.24％；負(fù)電荷2-ME-N對(duì)肺、肝和脾等組織具有良好的選擇性,其中肺的靶向性效果顯著,總靶效率達(dá)82.72％,比2-ME溶液肺的TEc值(47.69％)增加35.03％。
　　 3.2-ME納米混懸液體外細(xì)胞毒

6、作用研究。應(yīng)用MTT法對(duì)2-ME-N(負(fù)電荷)在體外對(duì)人食管癌EC9706細(xì)胞的細(xì)胞毒作用進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,與2-ME-S相比,2-ME-N對(duì)細(xì)胞的生長抑制作用明顯增強(qiáng),2-ME-S的IC50值是2-ME-N的2.29倍。
　　 4.2-ME納米混懸液對(duì)裸鼠人食管癌移植瘤抑制作用研究。裸鼠皮下接種EC9706細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型,30只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為5組,每組6只,分別為陰性對(duì)照組,陽性對(duì)照組(5-FU-S,20 mg·k

7、g-1·d-1),2-ME-N低、中、高劑量治療組(15,30,60 mg·kg-1·d-1)。治療7d后處死裸鼠,剝離瘤體稱重并計(jì)算抑瘤率。TUNEL法檢測腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù),免疫組化SP法檢測移植瘤組織VEGF、EGF、Ki-67和HIF-1α的表達(dá)。結(jié)果表明,陽性對(duì)照組和2-ME-N低、中、高劑量組均能抑制腫瘤的生長,抑瘤率分別為67.76％,27.47％,63.63％和78.42％,與陰性對(duì)照組比較均有顯著性差異,2-ME-N低、

8、中、高劑量組腫瘤抑制率呈現(xiàn)劑量依賴性。2-ME各劑量組的凋亡指數(shù)分別為(25.1±2.5)％、(39.4±5.1)％和(63.1±4.3)％,與陰性對(duì)照組(11.5±1.6)％比較,差異具有顯著性(P<0.05或P<0.01)。免疫組化結(jié)果顯示,2-ME能明顯抑制移植瘤組織VEGF、EGF、HIF-1α及Ki-67的表達(dá),其作用機(jī)制可能是通過下調(diào)腫瘤細(xì)胞內(nèi)VEGF、EGF、HIF-1α及Ki-67的表達(dá),從而抑制腫瘤細(xì)胞的增長。

9、　　 5.2-ME對(duì)人食管癌EC9706凋亡和凋亡基因Cyclin B1/c-Myc表達(dá)的影響。采用MTT法檢測2-ME對(duì)人食管癌EC9706細(xì)胞生長的抑制作用,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期,結(jié)果表明,2-ME抑制人食管癌EC9706細(xì)胞的生長呈時(shí)間及濃度依賴性。作用72h后,10μmol/L的2-ME對(duì)細(xì)胞生長的抑制率達(dá)60％,該濃度24 h的凋亡率由(2.38±0.42)％增加到(29.15±0.73)％；1-10μmol/L