氯代奎寧對A549細(xì)胞的增殖抑制作用研究.pdf

1、氯代奎寧對A549細(xì)胞的增殖抑制作用研究 目的： 研究氯代奎寧(CQ)對人類肺癌A549細(xì)胞的增殖抑制作用及其作用機(jī)制。探討磷脂酰膽堿特異性磷脂酶C(PC-PLC)在CQ誘導(dǎo)的空泡化、凋亡與壞死過程中的作用。 研究方法： 以不同濃度的氯代奎寧(CQ)(0.25 gmol/L～128 μmol/L)作用于體外培養(yǎng)的A549細(xì)胞0.72小時。 1．利用相差顯微鏡觀察A549細(xì)胞的形態(tài)變化 2

2、．MTT法檢測細(xì)胞存活率 3．中性紅吸收法檢測溶酶體空泡化程度 4、對活細(xì)胞進(jìn)行吖啶橙染色，在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞核變化，以檢測細(xì)胞凋亡。 5．乳酸脫氫酶(LDH)測試法檢測細(xì)胞是否出現(xiàn)壞死 6．用PC-PLC的特異性抑制劑D609研究PC-PLC的作用結(jié)果： 1、在低濃度(0.25 μmol/L～32 μmol/L)時，CQ能夠抑制A549細(xì)胞的增殖，同時，它還誘導(dǎo)細(xì)胞空泡化，使酸性區(qū)室總體積(

3、VAC)增大。 2、在高濃度(64μmol/L-128μmol/L)時，在24小時，CQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡，而空泡化程度比32 μmol/L時減弱了。 3、乳酸脫氫酶測試結(jié)果表明用CQ(32或64 μmol/L)處理A549細(xì)胞72小時或者CQ(128 μmol/L)48小時，A549細(xì)胞發(fā)生壞死。 4、D609(50 μmol/L)能夠抑制CQ(32 μmol/L)對A549細(xì)胞的增殖抑制作用和空泡化作

4、用，但不能影響CQ(128μmol/L)對A549細(xì)胞的增殖抑制作用和空泡化作用。結(jié)論： 1、氯代奎寧(CQ)能顯著抑制A549細(xì)胞的增殖。 2、在低濃度(0.25μmol/L～32 μmol/L)下，CQ通過增大溶酶體體積抑制A549細(xì)胞增殖，PC-PLC可能參與了這個過程。 3．在高濃度(64μmol／L-128 gmol／L)下，CQ誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡或壞死，但誘導(dǎo)空泡化的能力逐漸降低，PC-PLC可