miR-200c提高紫杉醇及吉非替尼對人肺癌A549細胞抑制作用的研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406521611271南昌大學碩士研究生學位論文miR200c提高紫杉醇及吉非替尼對人肺癌提高紫杉醇及吉非替尼對人肺癌A549細胞細胞抑制作用的研究抑制作用的研究miR200cimprovepaclitaxelgefitinibinhibitionintheA549humanlungcancercell尹燕軍尹燕軍培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱：邱峰主任醫(yī)師申請學位的學科門類：醫(yī)

2、學學科專業(yè)名稱：腫瘤學論文答辯日期：2014年6月答辯委員會主席：徐方云評閱人：吳建兵周榮偉2014年6月摘要II摘要目的：目的：1、確定miR200c轉(zhuǎn)染肺癌A549細胞最佳轉(zhuǎn)染濃度。2、觀察上調(diào)miR200c后，紫杉醇及吉非替尼對人肺癌A549細胞增殖及凋亡的變化。3、探討miR200c上調(diào)后，紫杉醇聯(lián)合吉非替尼是否具有協(xié)同作用。方法：方法：1、轉(zhuǎn)染實驗及PCR檢測：實驗分為轉(zhuǎn)染miR200cmimics組為實驗組，轉(zhuǎn)染miR200

3、cNC為陰性對照組，肺癌A549細胞為空白對照組；同時設(shè)置三個轉(zhuǎn)染濃度20nm、50nm及100nm。通過脂質(zhì)體lipo2000轉(zhuǎn)染72小時后，SYBRGreenRealtimePCR檢測各濃度轉(zhuǎn)染后miR200c表達變化及其下游ZEB1的表達變化，確定最佳轉(zhuǎn)染濃度。2、細胞增殖實驗：采用最佳濃度轉(zhuǎn)染細胞，將轉(zhuǎn)染組及陰性對照組各分成三組：紫杉醇單藥組（016nmolL）、吉非替尼單藥組（040umolL）、兩藥聯(lián)合組。通過MTT法測定m

4、iR200c轉(zhuǎn)染對各組細胞的增殖變化并計算各組的半數(shù)抑制率（IC50）。3、細胞凋亡實驗：將轉(zhuǎn)染組及陰性對照組各分成四組，分別加入紫杉醇IC50、吉非替尼IC50、兩藥聯(lián)合(紫杉醇IC50吉非替尼IC50）及不加藥物.。72小時后采用流式細胞儀檢測miR200c轉(zhuǎn)染對細胞凋亡影響。結(jié)果：結(jié)果：1、miR200c轉(zhuǎn)染后，20nm組miR200c表達量上調(diào)1365.29倍；50nm組miR200c表達量上調(diào)16440.88倍；100nm組m

5、iR200c表達量上調(diào)4352.11倍，分別與轉(zhuǎn)染組與陰性對照組和空白對照組相比，P值均0.01。20nm組ZEB1表達量下調(diào)24%；50nm組ZEB1表達量下調(diào)51%；100nm組ZEB1表達量下調(diào)34%，分別與轉(zhuǎn)染組與陰性對照組和空白對照組相比，P值均0.05。因此，50nm為最佳轉(zhuǎn)染濃度。2、轉(zhuǎn)染miR200cNC組與轉(zhuǎn)染miR200cmimics組對比，紫杉醇單藥的IC50為8.40vs6.09nmolL，P0.05；吉非替尼單