心力康合劑含藥血清對(duì)大鼠心肌細(xì)胞肥大影響的研究.pdf

1、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)過(guò)度活躍在多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用,血管緊張素Ⅱ作為重要的生長(zhǎng)促進(jìn)因子,對(duì)多種組織、細(xì)胞的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用,是刺激心肌肥厚的主要因素之一.本課題通過(guò)乳鼠心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng),比較血管緊張素Ⅱ刺激前后培養(yǎng)的心肌細(xì)胞周期分布改變情況,研究血管緊張素Ⅱ?qū)π募〖?xì)胞生長(zhǎng)的影響模式,同時(shí)分別從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、核轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)DNA、總蛋白合成、凋亡等方面研究心力康合劑含藥血清對(duì)AngⅡ誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大的影

2、響,以探討該藥物安全性及其作用機(jī)制.方法:通過(guò)對(duì)腹主動(dòng)脈縮窄致心肌肥厚大鼠灌服心力康合劑,制備心力康含藥血清,薄層色譜法檢測(cè)所取大鼠血清;應(yīng)用胰蛋白酶和膠原酶聯(lián)合分段消化法分離心肌細(xì)胞,采取差速貼壁的方法對(duì)心肌細(xì)胞進(jìn)行純化,原代培養(yǎng),建立細(xì)胞模型;免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)進(jìn)行α-Sarcomeric actin染色,鑒定心肌細(xì)胞純度;MTT法結(jié)合倒置相差顯微鏡分析心力康含藥血清對(duì)心肌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞周期分布、細(xì)胞內(nèi)DNA

3、合成及凋亡百分率;免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子c-Jun蛋白、凋亡相關(guān)基因Bcl-2及Bax表達(dá)水平;放免法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)心鈉素合成、分泌情況.結(jié)論:使用血管緊張素Ⅱ能顯著促進(jìn)乳鼠心肌細(xì)胞G0/G<,1>、G<,2>/M期DNA合成,增加細(xì)胞內(nèi)總蛋白含量,單純血管緊張素Ⅱ刺激可以誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生肥大反應(yīng),包括:細(xì)胞的體積增大,蛋白和DNA的合成增加;胚胎基因心鈉素及原癌基因c-Jun蛋白表達(dá)增加;在無(wú)外源性過(guò)度生長(zhǎng)刺激存在的條件下,心力康合劑