腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)病機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的:腎上腺髓質(zhì)增生(Adrenal Medulla Hyperplasia,AMH)是近30年來(lái)逐漸被人們認(rèn)識(shí)的一種少見(jiàn)疾病,臨床表現(xiàn)為以高血壓為主的綜合癥.其病因及發(fā)病機(jī)制尚不清楚.有研究表明,酪氨酸羥化酶(TH)在腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)病機(jī)制中起重要作用.通過(guò)對(duì)腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因表達(dá)水平的研究探討酪氨酸羥化酶蛋白在腎上腺髓質(zhì)增生大鼠腎上腺組織中的表達(dá)與腎上腺髓質(zhì)增生的關(guān)系及腎上腺髓質(zhì)增生發(fā)生的分子機(jī)理.方法

2、:Wistar大鼠隨機(jī)分為2組:正常對(duì)照組(NC組)和腎上腺髓質(zhì)增生組(AMH組).正常對(duì)照組,每只大鼠皮下注射0.9﹪的生理鹽水1ml·kg<'-1>·d<'-1>,共6周.AMH組為腎上腺髓質(zhì)增生組,按王衛(wèi)星介紹的方法復(fù)制腎上腺髓質(zhì)增生大鼠動(dòng)物模型:每只大鼠皮下注射0.1﹪的利血平1ml·kg<'-1>·d<'-1>,共6周.從第6周開(kāi)始隔日收集大鼠24h尿液.6周后下腔靜脈穿刺采血,3000r/min離心制備血清.氯胺酮50mg·

3、kg<'-1>腹腔注射麻醉,取出腎上腺組織10﹪中性甲醛固定,石蠟包埋.免疫組化S-P法測(cè)定酪氨酸羥化酶蛋白在正常對(duì)照組和腎上腺髓質(zhì)增生組大鼠腎上腺組織中的表達(dá).合成酪氨酸羥化酶探針,用原位雜交法檢測(cè)腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因mRNA的表達(dá),應(yīng)用高清晰彩色病理圖象測(cè)量系統(tǒng)(HPIAS-1000)進(jìn)行免疫組織化學(xué)圖象分析測(cè)定酪氨酸羥化酶免疫組織化學(xué)染色陽(yáng)性反應(yīng)物和原位雜交信號(hào)的平均積分光密度值(IDP).用高效液相色譜分析儀檢測(cè)大鼠24h

4、尿液3-甲氧4-羥基苦杏仁酸(VMA)含量和血清中NE、E的含量.結(jié)果:腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶蛋白質(zhì)及mRNA表達(dá)均明顯增強(qiáng),血清中的NE、E和24小時(shí)尿3-甲氧4-羥基苦杏仁酸(VMA)的含量明顯升高.并且TH蛋白的表達(dá)與血清中的NE、E和24小時(shí)尿VMA的含量呈正相關(guān)(r=0.895,0.646,0.667,P<0.01).結(jié)論:腎上腺髓質(zhì)增生大鼠模型腎上腺組織酪氨酸羥化酶基因表達(dá)增強(qiáng),且酪氨酸羥化酶的mRNA