Salusin-β對LDLR---小鼠動脈粥樣硬化發(fā)展的影響及機制的初步探討.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分: SaIusin-β在LDLR-/-動脈粥樣硬化模型小鼠主動脈的表達
　　 目的:探討心血管活性肽salusin-β在LDLR-/-動脈粥樣硬化(AS)模型小鼠主動脈內(nèi)表達情況。
　　 方法:6只雄性LDLR-/-小鼠給予高脂肪飲食造模12周以促成動脈粥樣斑塊的形成,6只C57BL/6J小鼠為正常對照組,予以普通飼料。12周后處死各實驗組小鼠,采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(R

2、T-PCR)、western blot及免疫組化方法分別檢測各組小鼠主動脈組織中的preprosalusin mRNA及蛋白水平的表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 (1)RT-PCR結(jié)果顯示:Preprosalusin mRNA的表達在模型組較正常對照組明顯增加(P＜0.01),有統(tǒng)計學意義。
　　 (2)Western blot結(jié)果顯示:與正常對照組相比,模型組小鼠主動脈內(nèi)preprosalusin蛋白含量明顯增

3、加(P＜0.01),差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 (3)免疫組織化學分析顯示:各組小鼠在內(nèi)皮細胞和VSMCs中均有salusin-β陽性染色,正常對照組、模型組的salusin-β積分光密度值分別為:6520.19±1666.93、19446.33±5091.595,組間存在顯著性差異(P＜0.01)。
　　 結(jié)論: LDLR-/-AS小鼠主動脈salusin-β的表達上調(diào)。
　　 第二部分: Salusin-β對

4、LDLR-/-小鼠動脈粥樣硬化發(fā)展的影響
　　 目的:探討心血管活性肽salusin-β對LDLR-/-小鼠AS發(fā)展的影響。
　　 方法:(1)將12只雄性LDLR-/-小鼠隨機分為兩組:模型組和salusin-β組,給予高脂肪飲食,另取6只C57BL/6J小鼠作為正常對照組,予以普通飼料喂養(yǎng)。Salusin-β組小鼠每天皮下注射1μg/kg的salusin-β,模型組小鼠皮下注射同體積的PBS。12周后處死各組小鼠,分

5、別檢測血清中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)及高密度脂蛋白(HDL)含量;HE、油紅O染色分析各組小鼠主動脈AS斑塊病變情況。
　　 結(jié)果:
　　 (1)模型組小鼠血清中TG、TC、LDL和HDL的濃度分別為(8.39±2.51)mmol/L,(24.05±13.86)mmol/L,(24.05±13.86)mmol/L和(7.28±4.46)mmol/L,與正常對照組相比,除HDL外,其余血脂

6、水平均顯著升高(P＜0.01);而salusin-β組小鼠血清中TG、TC、LDL和HDL的濃度分別為(9.49±4.80)mmol/L,(28.66±15.37)mmol/L,(21.08±15.03)mmol/L和(10.45±7.72)mmol/L,與模型組相比雖然有所增加,但是變化無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。模型組和salusin-β組小鼠的體重與正常對照組相比雖然有所增加,但亦無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 (

7、2)油紅O染色結(jié)果表明,模型組和salusin-β組的斑塊面積/內(nèi)膜面積明顯大于正常對照組(P＜0.01),而且salusin-β組斑塊面積/內(nèi)膜面積大于模型組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 (3)HE染色結(jié)果顯示,連續(xù)給藥12周后,中膜厚度各組間沒有差異(P＞0.05);模型組和salusin-β組的內(nèi)膜厚度與對照組比較明顯增厚(P＜0.01);salusin-β組內(nèi)膜厚度明顯大于模型組(P＜0.01);模型組和s

8、alusin-β組的I/M值明顯高于對照組(P＜0.05),salusin-β組與模型組的I/M值比較也有增大,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:皮下注射salusin-β可增加LDLR-/-小鼠的AS斑塊面積,增加主動脈內(nèi)膜厚度。
　　 第三部分: Salusin-β對血管平滑肌細胞增殖的影響
　　 目的:探討心血管活性肽salusin-β對血管平滑肌細胞(VMSCs)增殖的影響。
　　

9、方法:體外組織貼塊法培養(yǎng)大鼠中膜VMSCs,細胞生長至近融合狀態(tài)時用0.25％胰蛋白酶消化傳代,第3代細胞用于本實驗,實驗共分為4組:①空白對照組:給予PBS;②10-10mol/L salusin-β組;③10-9mol/L salusin-β組;④10-8mol/Lsalusin-β組。實驗方法包括:(1)MTT比色法檢測VSMCs的增殖狀況;(2)Western blot法檢測p-ERK1/2的表達;(3)RT-PCR法檢測c-f

10、os、c-myc mRNA表達。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與對照組相比,salusin-β具有明顯的促進VSMCs增殖的作用,而且在同一時間點,隨著salusin-β濃度(10-10、10-910-8mol/L)增加,VSMCs的吸光度值(A)增大(P＜0.01)。
　　 (2)Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,VMSCs經(jīng)濃度為10-9和10-8mol/L的salusin-β作用48 h后p-E

11、RK1/2表達均明顯增加(P＜0.01),而且salusin-β的濃度越大,p-ERK1/2表達增加越明顯。
　　 (3)增殖相關基因c-myc表達的光密度值隨著salusin-β濃度的增加(10-10、10-9、10-8mol/L)依次為:0.67±0.14、0.96±0.01、1.45±0.02,與對照組的0.49±0.05相比,明顯上調(diào)(P＜0.05);c-fos基因表達的光密度值分別為:0.66±0.06、0.84±0.