FGF21對動脈粥樣硬化的影響——體外及小鼠體內(nèi)作用機制研究.pdf

1、目的：
　　 研究人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞在FGF21刺激下，動脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1、ICAM1、VCAM1表達量的變化。脂肪細胞在FGF21刺激下，葡萄糖攝取量變化情況以及動脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1表達量的變化；研究不同處理組C57BL6小鼠和apoE-/-小鼠各組織中FGF21以及動脈粥樣硬化相關(guān)因子PON1表達量的變化。從而初步探討FGF21對動脈粥樣硬化的影響及其作用機制。
　　 方法：
　　 1．細

2、胞實驗中(1)不同濃度FGF21作用于HUVECs，酚-氯仿法提取RNA，逆轉(zhuǎn)成cDNA，擴增后，加入PON1、ICAM1、VCAM1引物進行real-timePCR，提蛋檢測PON1表達水平。同一濃度FGF21不同時間作用HUVECs，檢測PON1的mRNA表達量變化。(2)用不同濃度FGF21刺激HUVECs，作用15min后，提取細胞蛋白，Westernblot檢測P-Akt，P-Erk1/2的表達水平。(3)將3T3-L1細胞分

3、化為脂肪細胞，油紅染色驗證，用FGF21刺激，不同時間點分別取培養(yǎng)基測定葡萄糖攝取量。24h后收細胞，real-timePCR檢測PON1表達量。
　　 2．動物實驗中，雄性C57B6小鼠11只以及apoE-/-小鼠41只，體重25-30g，10-14w。C57B6小鼠給予正常食物(NN，n=11)，將apoE-/-小鼠隨機分為正常飲食組(NF，n=9)，高脂飲食組(HF,n=32)，一個月高脂模型造成，隨機選取12只給予普伐他

4、汀，即給藥組(HF+P,n=12)，用量為80μg/g/day，給藥二個月。兩個月后停止給予高脂食物，繼續(xù)給藥1個月后，眼眶放血處死，液氮凍存或多聚甲醛固定心、肝、脾、腎等臟器以及主動脈。用Elisa測定血清FGF21的表達情況。主動脈進行HE染色，光鏡觀察AS形成情況。主動脈進行油紅染色，觀察不同組主動脈脂肪組織的差別，判斷造模是否成功。免疫組化法觀察FGF21在不同組主動脈表達量的差別。主動脈、肝、腎提RNA，real-timePC

5、R檢測FGF21、PON1的水平；提蛋白，用Westernblot檢測不同組FGF21、PON1表達量的差別。
　　 結(jié)果：
　　 1．細胞實驗中(1)隨著FGF21作用時間延長，PON1的mRNA表達量也增加。ICAM1、VCAM1的mRNA表達量在不同F(xiàn)GF21濃度時均低于對照組。HUVECs經(jīng)不同濃度FGF21刺激12h后，PON1的mRNA表達量及蛋白表達量高于對照組，且呈劑量依賴性。(2)HUVECs經(jīng)不同濃度

6、FGF21刺激后，P-Akt和P-Erk1/2蛋白表達量隨著FGF21濃度的升高而增加。(3)脂肪細胞經(jīng)油紅染色證明分化成功；經(jīng)不同濃度FGF21刺激24h后，葡萄糖攝取量變化呈劑量依賴性；兩種濃度FGF21刺激脂肪細胞24h后，PON1的mRNA表達量及蛋白表達量均高于對照，但二者差別不明顯。
　　 2．動物實驗中(1)Elisa檢測，高脂食物apoE-/-小鼠血清FGF21的表達水平高于正常食物apoE-/-小鼠，給藥普伐他

7、汀后，F(xiàn)GF21的水平又降低。(2)光鏡下NN主動脈平滑肌排列整齊規(guī)則，管腔內(nèi)皮光滑，無增生。HF組平滑肌排列顯著紊亂，中膜明顯不規(guī)則增厚，內(nèi)膜有泡沫細胞以及斑塊形成，鈣化嚴重且廣泛。HF+P組主動脈病變較HF組明顯減輕，平滑肌排列稍紊亂，中膜有灶性鈣化。(3)油紅染色結(jié)果可見，HF組小鼠的主動脈的脂肪細胞明顯多于NF，且二者均多于NN組。(4)免疫組化顯示，F(xiàn)GF21在HF組主動脈的表達量多于NF組，給藥后，HF+P組主動脈的FGF2

8、1的表達量明顯降低。(5)定量PCR結(jié)果顯示，F(xiàn)GF21mRNA在正常C57BL6小鼠的主動脈、肝、腎、脾的表達水平均高于apoE-/-小鼠。HF組小鼠肝FGF21的mRNA表達量高于NF組小鼠，給藥普伐他汀后明顯降低，HF組小鼠腎FGF21的mRNA表達量高于NF組小鼠，給藥后沒有降低。(6)Westernblot結(jié)果顯示，HF組小鼠肝FGF21、PON1的mRNA表達量高于NF組小鼠肝中的表達，且二者均高于NN，給藥后表達量又降低。

9、
　　 結(jié)論：
　　 1、HUVECs中，F(xiàn)GF21上調(diào)抗動脈粥樣硬化因子PON1，下調(diào)致動脈粥樣硬化因子ICAM1、VCAM1的表達量。這些影響可能與Akt和Erk1/2通路有一定的關(guān)聯(lián)。FGF21可以提高脂肪細胞對葡萄糖的攝取量，隨著FGF21濃度的增加而增加，同時可以提高脂肪細胞中抗動脈粥樣硬化因子PON1的表達量。
　　 2、動脈粥樣硬化小鼠的血清、主動脈、肝及腎的FGF21表達量都比正常小鼠顯著增加，在