

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、[目的和意義]:
葛根為江蘇省中醫(yī)院原創(chuàng)制劑“血復康”主要成分之一,臨床治療慢性粒細胞性白血病獲得了較好療效,在急性髓系白血病(acutemyelocyticLeukemia,AML)高白細胞癥的輔助治療也取得了一定療效。近五年來,課題組對葛根主要活性成分葛根總黃酮、葛根素、大豆甙元處理不同AML細胞株的相關研究中發(fā)現(xiàn):葛根素及大豆甙元對相關AML細胞株的增殖影響微乎其微,而葛根總黃酮則具有不同程度的增殖抑制作用;進一步選
2、用Kasumi-1(AML-M2型細胞株,AML1/ETO)、HL-60(AML-M2型細胞株)、NB4和U937(AML-M5型細胞株)細胞株為研究對象,研究葛根總黃酮對不同AML細胞可能的作用,結果發(fā)現(xiàn)12.5~200μg/mlPRF體外對不同AML細胞株具有選擇性增殖抑制作用,以NB4細胞最強;可影響上述細胞的細胞周期進程,阻滯細胞子S期,促進細胞凋亡。同時,體內實驗也證明,上述劑量PRF可以延長NB4細胞異種移植瘤裸鼠的生存周期
3、,抑制移植瘤瘤體的增長。在此研究基礎上,本課題采用更低濃度PRF(0~50μg/ml),體外干預急性早幼粒細胞白血病(acutepromyelocyticLeukemia,APL)維甲酸敏感細胞株NB4,以期進一步探討較低濃度PRF±ATO對NB4細胞增殖及凋亡的影響;借助維甲酸耐藥細胞株NB4-R1探討PRF±ATO干預NB4細胞與維甲酸受體可能的關系;PRF誘導的NB4細胞凋亡與MAPK及JNK相關信號通路的相關性和意義。
4、 [實驗方法]:
1.實驗分組:空白對照組、DMSO溶劑對照組、0μg/mlPRF±1μMATO、10μg/mlPRF±1μMATO、30μg/mlPRF±1μMATO、50μg/mlPRF±1μMATO
2.PRF±ATO作用NB4、NB4-R1細胞24、48、72h,MTT法檢測增殖抑制率;
3.PRF±ATO作用NB4、NB4-R1細胞48h,瑞氏染色觀察NB4、NB4-Rl細胞形態(tài)學
5、變化,激光共聚焦顯微技術觀察NB4、NB4-R1細胞核形態(tài)學變化;流式細胞術FITC-AnnexinV/PI雙染法檢測NB4、NB4-R1細胞早期凋亡率改變;流式細胞術檢測NB4、NB4-R1細胞細胞周期改變;
4.采用JNK抑制劑SP600125特異性抑制JNK1/2。分別以0μg/mlPRF±10μMSP600125、10μg/mlPRF±10μMSP600125、30μg/mlPRF±10μMSP600125、50μ
6、g/mlPRF±10μMSP600125處理NB4細胞48h,westernblotting檢測MAPK及JNK通路相關蛋白表達改變。
[結果]:
1.10、30、50μg/mlPRF±1μMATO可有效抑制急性早幼粒細胞白血病維甲酸敏感細胞株NB4及維甲酸耐藥細胞株NB4-R1增殖,呈濃度-時間依賴性(p<0.05);ATO聯(lián)合處理組比PRF單藥組細胞凋亡更顯著,組間具有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。1μMA
7、TO在以上時間段能有效抑制NB4細胞增殖,并呈時間依賴性,而24、48h卻促進NB4-R1細胞增殖。10、30、50μg/mlPRF單藥處理NB4細胞24、48、72h,IC50分別為39.82、27.45、19.27μg/ml,10、30、50μg/mlPRF+1μMATO聯(lián)合組IC50為29.30、21.08、7.56μg/ml;10、30、50μg/mlPRF單藥處理NB4-R1細胞,IC50分別為71.66、34.29、31.4
8、4μg/ml,10、30、50μg/mlPRF+1μMATO聯(lián)合組IC50為38.50、24.28、16.62μg/ml。
2.瑞氏染色及激光共聚焦顯微技術見對照組細胞形態(tài)基本正常,PRF作用48h后,細胞呈現(xiàn)明顯凋亡特征。
3.10、30、50μg/mlPRF單藥處理NB4細胞48h后,細胞早期凋亡率分別為6.6%、9.4%、10.7%,聯(lián)合1μMATO則分別為10.0%、10.8%、13.1%,聯(lián)合組較單
9、藥組顯著(p<0.05),具有統(tǒng)計學差異;NB4-R1細胞10、30、50μg/mlPRF單藥組,分別為7.14%,9.01%,11.38%,聯(lián)合組分別為8.18%、10.04%、14.59%。以上兩種細胞,單藥組及聯(lián)合組早期凋亡率均呈濃度依賴性增加(p<0.05),聯(lián)合組較單藥組顯著p<0.05)。
4.PRF作用NB4、NB4-R1細胞48h后,30、50μg/mlPRF±ATO1μM組均出現(xiàn)亞二倍體細胞,隨著濃度增加
10、亞二倍體峰逐漸增高,S期細胞增多,提示PRF影響細胞周期進程,使細胞阻滯于S期。
5.隨著PRF誘導的NB4細胞凋亡增加,JNK1、JNK2/3、p38MAPK、ERK、TNFα表達上調;SP600125特異性抑制JNK1/2后,不同濃度PRF誘導的NB4細胞JNK1、JNK2/3、p38MAPK表達明顯受抑;ERK1/2、TNFα在50μg/mlPRF組表達下調,10、30μg/mlPRF組表達卻上調。
[
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 葛根總黃酮體外誘導NB4細胞凋亡分子機制.pdf
- 葛根總黃酮誘導NB4細胞凋亡與JNK相關信號分子.pdf
- 全反式維甲酸聯(lián)合三氧化二砷對NB4、R4細胞株誘導分化及凋亡的實驗研究.pdf
- 葛根總黃酮誘導急性髓細胞白血病細胞株SHI-1細胞凋亡的實驗研究.pdf
- 丹參酮ⅡA與全反式維甲酸協(xié)同誘導急性早幼粒細胞白血病細胞株(NB4)分化和凋亡.pdf
- 維甲酸、三氧化二砷誘導NB4細胞TRAILmRNA表達的研究.pdf
- 小檗胺誘導白血病細胞株NB4細胞凋亡及其機制的研究.pdf
- 維甲酸誘導肝癌細胞株凋亡及Midkine基因表達的研究.pdf
- 檸檬醛誘導急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4凋亡機制的研究.pdf
- MiR-146a在全反式維甲酸誘導NB4細胞分化中的作用.pdf
- 葛根總黃酮誘導急性髓細胞白血病細胞株HL-60細胞分化的實驗研究.pdf
- 維甲酸類藥物對NB4細胞作用的實時監(jiān)測.pdf
- 黃芪總苷誘導人白血病NB4細胞凋亡機制的研究.pdf
- 檸檬醛抑制NB4細胞增殖并誘導其凋亡的實驗研究.pdf
- 4-氨基-2-三氟甲基苯基維甲酸酯誘導NB4細胞分化及其機制研究.pdf
- 亞硒酸鈉誘導人急性早幼粒細胞白血病細胞株NB4和耐藥細胞株MR2的凋亡及其機制的初步研究.pdf
- 三氧化二砷聯(lián)合全反式維甲酸誘導NB4細胞核因子—kb、ROS表達的研究.pdf
- 丹參酮誘導耐維甲酸的早幼粒細胞白血病細胞株分化的體外研究.pdf
- NB4細胞在維甲酸作用下TGF-β1信號傳導途徑表達變化.pdf
- 高三尖杉酯堿對NB4細胞株的作用機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論