MiR-146a在全反式維甲酸誘導(dǎo)NB4細胞分化中的作用.pdf

1、目的和意義：檢測全反式維甲酸（ATRA）誘導(dǎo)急性早幼粒細胞白血?。ˋPL）細胞株NB4細胞分化前后miRNA 表達譜的變化，并利用生物信息學(xué)方法對其靶基因進行預(yù)測，選出和細胞增殖分化相關(guān)的miRNA，并進行功能研究，進而探討miRNA 在APL細胞分化中的作用。 實驗方法和結(jié)果： 第一部分，通過miRNA基因芯片檢測ATRA誘導(dǎo)NB4細胞分化前后各時間點的表達譜差異，利用miRNA數(shù)據(jù)庫預(yù)測篩選誘導(dǎo)分化中變化的miRNA

2、的靶基因。然后找出其中和增殖分化潛在相關(guān)的miRNA，并用TaqMan real-time PCR技術(shù)驗證其表達。miRNA芯片結(jié)果顯示：在ATRA誘導(dǎo)NB4細胞分化后，表達顯著上調(diào)的miRNA有8個，顯著下調(diào)的有15個。其中miR-146a在ATRA處理NB4細胞后表達量逐漸降低，而其潛在靶基因Smad4 mRNA和蛋白（TGF-β1/Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中公共調(diào)節(jié)型Smad）的表達呈逐漸上升趨勢。 第二部分，利用DNA重組技

3、術(shù)構(gòu)建miR-146a表達質(zhì)粒及含Smad43’UTR中miR-146a互補結(jié)合位點的報告基因重組質(zhì)粒，與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染293T細胞，測定相對熒光素酶活性，分析miR-146a和其潛在靶基因Smad4之間的作用關(guān)系。瞬時轉(zhuǎn)染結(jié)果顯示，實驗組相對熒光素酶活性明顯低于對照組，下降30.72％。miR-146a可抑制Smad4的轉(zhuǎn)錄激活，降低Smad4蛋白的表達。 結(jié)論：miRNA在全反式維甲酸誘導(dǎo)NB4細胞分化的信號傳導(dǎo)