維甲酸衍生物誘導腫瘤細胞凋亡機制研究.pdf

1、維甲酸衍生物是近年來頗受重視的腫瘤治療藥物,而CD437(又稱AHPN;6-(3-(1-adamantyl)-4-hydroxyphenyl)-2-naphthalene carboxylic acid)是其中最受關(guān)注的一種。CD437誘導腫瘤細胞凋亡的研究目前已有眾多的報道,最近發(fā)現(xiàn), CD437還可以通過誘導細胞內(nèi)核孤兒受體TR3/Nur77的易位而啟動細胞凋亡。核孤兒受體TR3/Nur77是近年發(fā)現(xiàn)的新的凋亡效應蛋白,一般認為,T

2、R3的主要功能是作為核轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控一系列靶基因的轉(zhuǎn)錄。新近的研究卻發(fā)現(xiàn),除作為轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮作用外,當細胞受到一些誘導因子作用時 TR3/Nur77可以從細胞核進入細胞漿,定位于線粒體,通過與線粒體外膜Bcl-2蛋白作用,改變線粒體膜的通透性,使線粒體間質(zhì)內(nèi)的促凋亡蛋白釋放,啟動細胞凋亡。對于TR3/Nur77在細胞凋亡過程中的作用,目前尚有許多問題有待闡明,如可能存在的內(nèi)源性配體及亞細胞定位對其功能的影響;磷酸化對 TR3/Nur77亞

3、細胞定位及對凋亡誘導功能的影響等。
　　本研究在以往文獻報道及前期研究的基礎(chǔ)上,通過免疫熒光觀察、差速離心和蔗糖密度梯度離心分析、免疫沉淀和免疫印跡等方法,首次發(fā)現(xiàn)并證實核孤兒受體TR3/Nur77在細胞凋亡過程中的新的亞細胞定位,即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位。隨后,通過半定量 PCR、流式細胞術(shù)、激光共聚焦顯微鏡下細胞內(nèi)鈣離子檢測、免疫印跡等方法,對TR3/Nur77的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位在 CD437誘導的細胞凋亡過程中所發(fā)揮的重要作用進行了研究和闡明

4、。研究結(jié)果表明,在人食管癌細胞 EC109、EC9706和人神經(jīng)母細胞瘤細胞 SK-N-SH中,核孤兒受體 TR3/Nur77在細胞漿中的亞細胞定位除線粒體,還包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。在 CD437等藥物的作用下, TR3/Nur77可迅速轉(zhuǎn)移到線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,并分別經(jīng)這兩個細胞器啟動細胞凋亡。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,TR3/Nur77可與 Bcl-2蛋白相互作用,影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對細胞內(nèi)鈣離子濃度的調(diào)控,引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應,并通過激活 caspase-4啟動細胞

5、凋亡。另外,實驗中還發(fā)現(xiàn)在上述細胞中,CD437可通過激活線粒體途徑、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑和外源性的死亡受體途徑誘導細胞凋亡。
　　綜上所述,本研究首次發(fā)現(xiàn)并證實了在維甲酸衍生物 CD437誘導腫瘤細胞凋亡過程中,核孤兒受體 TR3/Nur77可以易位到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,并通過啟動內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑誘導細胞凋亡。同時發(fā)現(xiàn)并證實 CD437可通過多種凋亡途徑誘導腫瘤細胞的凋亡。上述研究結(jié)果對于深入、完善細胞損傷和凋亡理論,明確細胞器的交互調(diào)節(jié)機制及抗腫瘤新藥