益腎化瘀方拮抗腎間質(zhì)纖維化有效部位篩選及對UUO大鼠腎組織TGF-β1、BMP-7的調(diào)控作用.pdf

1、目的：益腎化瘀方（YiShenHuaYuRecipe，YSHYR）是導(dǎo)師張琳琪教授經(jīng)過多年臨床實踐經(jīng)驗總結(jié)出來的治療慢性腎臟病的經(jīng)驗方；前期進行的慢性腎臟病2、3期腎虛血瘀證臨床觀察證實益腎化瘀方臨床療效顯著，前期動物實驗已初步證實其可通過調(diào)控相關(guān)細胞因子表達而具有拮抗RIF的作用。本實驗以拮抗腎間質(zhì)纖維化為指標，通過建立腎間質(zhì)纖維化大鼠（UUO）模型，觀察益腎化瘀方不同極性部位對UUO大鼠腎功能、腎組織病理形態(tài)和羥脯氨酸含量的影響，以

2、及對腎間質(zhì)纖維化標志蛋白 FN、TGF-β1、BMP-7表達的調(diào)控作用，從而初步篩選出益腎化瘀方拮抗腎間質(zhì)纖維化的有效部位，為進一步探究其拮抗腎間質(zhì)纖維化有效組分奠定理論基礎(chǔ)。
　　方法：1.益腎化瘀方不同極性部位的提取：按照系統(tǒng)溶劑提取法，將益腎化瘀方按極性從小到大萃取出石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水飽和4個極性部位。
　　2.采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎法建立大鼠腎間質(zhì)纖維化（UUO）模型
　　將147只雄性SD大鼠隨機分為假

3、手術(shù)組、模型組、益腎化瘀方石油醚部位組、益腎化瘀方乙酸乙酯部位組、益腎化瘀方正丁醇部位組、纈沙坦組，每組21只。除假手術(shù)組外其余各組均采用單側(cè)輸尿管結(jié)扎法建立腎間質(zhì)纖維化大鼠（UUO）模型；分別于UUO術(shù)后第3、7、14d，每組隨機選取7只，腹主動脈采血檢測腎功能；光鏡下觀察UUO大鼠腎組織病理形態(tài)學(xué)變化，采用堿性水解法檢測腎組織中羥脯氨酸的含量，ELISA法檢測腎組織中FN的表達變化，免疫組化檢測腎組織TGF-β1、BMP-7的表達變

4、化。
　　結(jié)果：（1）益腎化瘀方不同極性部位對UUO模型大鼠腎功能的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血清 BUN、Scr、CysC隨著時間延長逐漸升高；與模型組相比，各給藥干預(yù)組大鼠血清 BUN、Scr、CysC各時間點水平明顯降低。
　?。?）益腎化瘀方不同極性部位對UUO模型大鼠腎組織病理形態(tài)的影響假手術(shù)組大鼠在不同時間點內(nèi)腎組織病理均未見明顯異常；模型組大鼠腎組織病理變化明顯，且隨著時間的延長逐漸加重，主要表現(xiàn)為腎小管上

5、皮細胞脫落、變性，腎間質(zhì)炎癥細胞浸潤及纖維化；各給藥組大鼠腎組織病理變化在各時間點均明顯輕于模型組，其中以益腎化瘀方正丁醇部位病變最輕。
　?。?）益腎化瘀方不同極性部位對UUO模型大鼠腎組織羥脯氨酸含量的影響與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腎組織中羥脯氨酸的含量增加明顯，并隨時間的延長逐漸升高。與模型組相比，各給藥干預(yù)組腎組織中羥脯氨酸含的量明顯下降，且以益腎化瘀方正丁醇部位組和纈沙坦組下降最為顯著，二者組間無統(tǒng)計學(xué)差異性(P＞0.0

6、5)。
　　（4）益腎化瘀方不同極性部位對UUO模型大鼠腎組織中FN表達變化的影響假手術(shù)組大鼠在整個實驗過程中腎組織中FN無明顯變化。模型組大鼠腎組織中FN明顯升高，并隨時間的延長，腎組織中FN逐漸升高。與模型組相比，各給藥組腎組織中FN均有不同程度明顯降低。
　?。?）益腎化瘀方不同極性部位對UUO模型大鼠腎組織中TGF-β1、BMP-7表達變化的影響假手術(shù)組大鼠腎組織中TGF-β1陽性表達極少；模型組大鼠腎組織中TGF-

7、β1隨著時間的延長表達明顯增多；各給藥干預(yù)組大鼠腎組織中在不同時間點TGF-β1的陽性表達明顯均少于模型組，其中以益腎化瘀方正丁醇部位組效果最為明顯，和纈沙坦組二者無統(tǒng)計學(xué)差異（P﹥0.05），BMP-7則相反。
　　結(jié)論：
　　1.采用系統(tǒng)溶劑提取法，成功獲取益腎化瘀方石油醚部位、益腎化瘀方乙酸乙酯部位、益腎化瘀方正丁醇部位和益腎化瘀方水飽和部位。在4個極性部位中，益腎化瘀方正丁醇部位能夠顯著減輕UUO大鼠腎組織病理學(xué)損傷

8、，并且降低UUO大鼠血清BUN、Scr、CysC水平，降低腎組織中羥脯氨酸含量，其作用與纈沙坦療效相當，而其余3個極性部位的改善作用不甚明顯，證實益腎化瘀方正丁醇部位具有較好的延緩腎間質(zhì)纖維化作用。
　　2.益腎化瘀方正丁醇部位能夠顯著降低腎組織中FN含量，抑制大鼠腎組織中TGF-β1的表達、上調(diào)BMP-7的表達，表明其可以減少ECM的沉積,減輕腎間質(zhì)纖維化的程度,具有拮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。
　　3.益腎化瘀方正丁醇部位可