壓力負(fù)荷過(guò)重大鼠心臟交感神經(jīng)密度與去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)變化.pdf

1、目的： 觀察發(fā)生壓力負(fù)荷過(guò)重所致心衰時(shí)大鼠心臟交感神經(jīng)密度變化與去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(norepinephrinetransporter，NET)表達(dá)間的關(guān)系。 方法： 將20只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為四組：即心衰1月組(n=5)、心衰2月組(n=5)、正常對(duì)照組(n=5)和心肌細(xì)胞培養(yǎng)取材組(n=5)，對(duì)心衰1月組及心衰2月組大鼠采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立大鼠心臟壓力超負(fù)荷心衰模型。(1)有創(chuàng)血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)：分

2、別在手術(shù)1月后(對(duì)心衰1月組大鼠檢測(cè))、2月后(對(duì)心衰2月組及正常對(duì)照組檢測(cè))通過(guò)左心室導(dǎo)管測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)：平均動(dòng)脈壓(MBP)、左心室收縮壓(LNSP)、左心室舒張末壓(LVEDP)、左心室內(nèi)壓上升及下降最大速率(±dp/dtmax)，計(jì)算左、右心室重量指數(shù)(LVMI、RVMI)，觀察心臟結(jié)構(gòu)變化。(2)SPG熒光染色法(sucrose-potassium phosphate-glyoxylic acidmethod)：取左心室(

3、心衰1、2月及正常對(duì)照組)肌肉制作組織冰凍切片，用SPG熒光染色法觀察心肌組織內(nèi)交感神經(jīng)密度變化，在熒光顯微鏡鏡下觀察顯色結(jié)果(以380～420 nm高壓汞燈為光源激發(fā))并攝片。利用軟件image pro plus6.0計(jì)數(shù)樣本組織中交感神經(jīng)的平均光密度(mean density)值。(3)心肌細(xì)胞培養(yǎng)：取心肌細(xì)胞培養(yǎng)組大鼠的心臟進(jìn)行細(xì)胞分離，對(duì)大鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，然后對(duì)培養(yǎng)好的的心肌細(xì)胞進(jìn)行爬片處理(爬好片的心肌細(xì)胞用于免疫組化雙

4、重染色)。(4)NET及TH免疫組織化學(xué)雙重染色：取左心室(心衰1、2月及正常對(duì)照組)肌肉制作組織冰凍切片，將切片與爬好培養(yǎng)心肌細(xì)胞的玻片一起進(jìn)行NET及TH免疫組織化學(xué)雙重染色，觀察左心室心肌組織中NET及酪氨酸羥化酶(tyrosine hvdroxvlase，TH)的變化，在顯微鏡鏡下觀查顯色結(jié)果并攝片。利用軟件image pro plus6.0計(jì)數(shù)樣本組織中交感神經(jīng)的平均光密度(mean density)值。 結(jié)果：

5、 (1)心臟重量及血流動(dòng)力學(xué)測(cè)量結(jié)果：心衰1月組LNMI、RVMI、MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均較正常對(duì)照組升高(p<0.05)；心衰2月組LNMI、RVMI、MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均較正常對(duì)照組升高(p<0.05)；心衰2月組MBP、LNSP、LVEDP、±dp/dtmax值均較心衰1月組降低(p<0.05)，LVMI、RVMI升高(p<0.05)。 (2)心肌交感神經(jīng)SP

6、G熒光染色計(jì)數(shù)結(jié)果：心衰1、2月組及正常對(duì)照組染色計(jì)數(shù)值無(wú)明顯變化(p>0.05)。 (3)NET及TH免疫組織化學(xué)雙重染色計(jì)數(shù)結(jié)果：TH染色，心衰1、2月組及正常對(duì)照組染色計(jì)數(shù)值對(duì)比無(wú)明顯變化(p>0.05)。NET染色，心衰1月組染色計(jì)數(shù)值較正常對(duì)照組降低(p<0.05)；心衰2月組染色計(jì)數(shù)值較正常對(duì)照組降低(p<0.05)；心衰2月組染色計(jì)數(shù)值較心衰1月組降低(p<0.05)；培養(yǎng)心肌細(xì)胞對(duì)照組染色未見(jiàn)陽(yáng)性結(jié)果。