去甲腎上腺素與鋁免疫毒性的關(guān)系.pdf

1、在體實(shí)驗(yàn)以Wistar大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,將60只體重為110g～120g的大鼠隨機(jī)均分為4組,飲水染鋁,三氯化鋁(AlCl3)水溶液的濃度分別為0(對(duì)照組,C組)、64.18mg/kg(低劑量組,L組)、128.36mg/kg(中劑量組,M組)、256.72mg/kg(高劑量組,H組),連續(xù)染鋁120d,復(fù)制亞慢性鋁中毒大鼠模型,通過(guò)對(duì)染鋁大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群、血清及下丘腦中去甲腎上腺素(NE)水平,血清中促

2、腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)酮(Cort)含量,脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP含量,脾臟淋巴細(xì)胞膜上β2-AR密度及β2-ARmRNA表達(dá)水平的觀測(cè),探討染鋁對(duì)大鼠免疫狀態(tài)和NE水平的影響,找出NE水平與染鋁大鼠免疫狀態(tài)的關(guān)系:
　　 體外實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)1月齡的大鼠脾臟淋巴細(xì)胞為研究對(duì)象,在培養(yǎng)液中分別添加0(對(duì)照組,W-C組)、1/20IC50(低劑量組,W-L組)、1/10IC50(中劑量組,W-

3、M組)、1/5IC50(高劑量組,W-H組)的.AlCl3,通過(guò)對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè),確定1/10IC50鋁濃度可致淋巴細(xì)胞免疫抑制。以添加此染鋁濃度的淋巴細(xì)胞為研究對(duì)象,分別添加0(對(duì)照組,N-C組)、10-10(低劑量組,N-L組)、10-9(中劑量組,N-M組)、10-8(高劑量組,N-H組)mol/L的NE,通過(guò)對(duì)大鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖、免疫細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群,脾臟淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP含量,脾

4、臟淋巴細(xì)胞膜上β2-AR密度及β2-ARmRNA表達(dá)水平的檢測(cè),探討NE對(duì)鋁免疫毒性的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 1.亞慢性鋁中毒大鼠血清和脾臟中鋁含量均顯著或極顯著高于C組;T、B淋巴細(xì)胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+的比值以及脾臟組織中IL-2和TNF-α含量均顯著或極顯著低于C組,說(shuō)明鋁可致大鼠免疫功能抑制。
　　 2.亞慢性鋁中毒大鼠

5、血清中NE含量、脾臟淋巴細(xì)胞膜上的β2-AR密度及β2-ARmRNA表達(dá)水平和淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP含量均顯著或極顯著高于C組,說(shuō)明鋁能增加外周NE水平,并激活β2-AR-cAMP途徑,直接抑制大鼠免疫功能。
　　 3.亞慢性鋁中毒大鼠下丘腦中NE含量顯著低于C組,血清中CRH、ACTH和Cort含量顯著或極顯著高于C組,說(shuō)明鋁能抑制突觸前膜對(duì)NE的再攝入,提高細(xì)胞外NE水平,進(jìn)而通過(guò)激活下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸,間接抑制免

6、疫功能。
　　 4.亞慢性鋁中毒大鼠血清中NE水平與T、B淋巴細(xì)胞增值率,脾臟組織中IL-2和TNF-α含量,CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率以及CD4+/CD8+的比值均呈顯著負(fù)相關(guān),說(shuō)明NE與鋁的免疫毒性密切相關(guān),外周高水平NE可加重鋁引發(fā)的免疫抑制。
　　 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　 1.應(yīng)用MTT比色法測(cè)得染鋁24h后大鼠脾臟淋巴細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)為5.52mmol/L,95％可信區(qū)間為4.7

7、6mmol/L～6.38mmol/L。
　　 2.隨染鋁劑量的增加,大鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+的比值以及淋巴細(xì)胞分泌IL-2和TNF-α含量均逐漸降低,W-M組、W-H組顯著或極顯著低于W-C組,W-L組與W-C組比較差異不顯著,說(shuō)明鋁能抑制淋巴細(xì)胞功能,且因?yàn)閃-M組能引起顯著的免疫抑制,故選擇W-M組作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的研究對(duì)象。
　　 3.隨染鋁劑量的增加,

8、大鼠脾臟淋巴細(xì)胞膜上的β2-AR密度及β2-ARmRNA表達(dá)水平和淋巴細(xì)胞內(nèi)cAMP含量高于W-C組,且W-M組、W-H組均極顯著高于W-C組,同時(shí)伴隨淋巴細(xì)胞免疫功能抑制,說(shuō)明β2-AR-cAMP途徑是鋁免疫毒性的機(jī)制之一。
　　 4.隨NE濃度的增加,淋巴細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)cAMP含量顯著高于N-C組,大鼠T淋巴細(xì)胞增殖率,CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞表達(dá)率和CD4+/CD8+的比值以及淋巴細(xì)胞分泌IL-2和TNF-α含量