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文檔簡介
1、目的:觀察不同濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯(Zi Le Tiao Jing Sou p-Z LTJS)含藥血清對體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細胞(GC)增殖與分泌雌二醇(E2)及孕酮(P)、激活素A(ActA)的影響,探討滋勒調(diào)經(jīng)湯治療腎虛血少型的月經(jīng)量少、閉經(jīng),卵巢早衰等卵巢儲備功能下降內(nèi)分泌疾病的作用機制,為滋勒調(diào)經(jīng)湯在臨床上的進一步推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。
方法:
1.以一定濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯和生理鹽水灌胃6周齡健康近成熟SD大鼠,
2、制備大鼠含藥血清和無藥血清,并配置成體積分數(shù)為10%的小、中、大三組不同劑量濃度的含藥血清和無藥血清,且設(shè)空白對照組;
2.采用簡單機械分離加胰酶消化的方法,用3周齡的健康未成年SD大鼠制備大鼠卵巢顆粒細胞(GC),并建立其體外培養(yǎng)體系,光學顯微鏡下觀察大鼠卵巢顆粒細胞的生長情況,通過FSHR免疫組化法以及細胞爬片HE染色法進行細胞鑒定,用MTT法繪制細胞的生長曲線;
3.依據(jù)血清藥理學原理方法,在GC體外培養(yǎng)24h
3、待其貼壁后,用小、中、大等不同濃度的滋勒調(diào)經(jīng)湯的大鼠含藥血清和大鼠無藥血清對大鼠卵巢顆粒細胞進行干預,用MTT法測定OD值,觀察顆粒細胞增殖情況;
4.通過放射免疫分析法測培養(yǎng)液中E2、P的含量;
5.用ELISA法檢測培養(yǎng)液中ActA的含量。
結(jié)果:
1.體外培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細胞生長狀態(tài)良好,24小時細胞核為藍紫色,細胞漿為棕黃色,陽性率>90%;基本貼壁,3-4天進入增生期,15天細胞明顯凋
4、亡,F(xiàn)HSR免疫組化陽性染色:核為藍紫色,漿為棕黃色,陽性率>90%;HE染色:核被染成深藍色,胞漿被染成淡紅色;
2.滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清對大鼠卵巢顆粒細胞(GC)的增殖的影響:小、中、大三組滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清OD值均明顯高于無藥血清組和空白對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清各組OD與藥物濃度存在一定的依賴性,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
3.滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清對大鼠卵巢顆粒細
5、胞分泌的影響:空白對照組和無藥血清組的大鼠卵巢顆粒細胞的E2、P、ActA的分泌量均低于小、中、大三組滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清小、中、大組E2、P、ActA分泌量與濃度存在一定的依賴性,各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:滋勒調(diào)經(jīng)湯含藥血清能夠促進體外培養(yǎng)的大鼠顆粒細胞的增殖和促進E2、P、ActA的分泌,推測在機體內(nèi),滋勒調(diào)經(jīng)湯可能通過改善卵巢局部自分泌、旁分泌的
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