TGF-β和Smad4在絕經(jīng)過渡期大鼠卵巢及其顆粒細胞中的表達變化.pdf

1、絕經(jīng)過渡期是一個以卵巢功能逐漸衰退為中心的動態(tài)過程。卵巢功能衰退的基本表現(xiàn)為卵巢儲備功能降低，產(chǎn)生卵子能力減弱，卵泡質(zhì)量下降，出現(xiàn)月經(jīng)稀少甚至閉經(jīng)等癥狀，導(dǎo)致女性生育能力下降及性激素的缺乏，嚴(yán)重影響女性的生命健康及生活質(zhì)量。因此探尋卵巢功能衰退的內(nèi)在機制，尋找延緩卵巢功能衰退的方法具有重要的臨床意義。
　　卵巢自身局部微環(huán)境對卵巢功能有重要調(diào)控作用，目前已知卵巢表達的多種基因中有許多屬于轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming

2、growth factor beta)超家族的成員，其中TGF-β是TGF-β超家族的一個亞型，與卵巢功能密切相關(guān)，它們以自分泌或旁分泌的方式通過Smad蛋白家族表達在不同時期卵泡的卵母細胞、顆粒細胞、卵泡膜細胞，在卵泡的生長、發(fā)育、閉鎖，卵細胞的發(fā)育成熟方面都有重要的作用。Smad4是TGF-β信號傳導(dǎo)通路的中心環(huán)節(jié)，在TGF-β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用尤為重要。因此本課題以絕經(jīng)過渡期雌性大鼠為研究對象，旨在研究在絕經(jīng)過渡期卵巢功能衰退過程中

3、TGF-β和Smad4在卵巢及其顆粒細胞中的表達變化，初步探究其與卵巢功能衰退的關(guān)系。
　　本實驗選用12月齡雌性SD大鼠40只，采用陰道涂片法篩選動物模型，將符合條件大鼠隨機分為兩組:絕經(jīng)過渡期組(MT組)和雌激素治療組(E2組)，另選20只6月齡雌性SD大鼠，同樣采用方法篩選動情周期正常大鼠，將符合條件大鼠作為空白對照組（C組）。雌激素治療組(E2)給予雌激素治療6周，其余兩組給予空白溶劑芝麻油。各組隨機分為兩部分，一部分麻醉

4、處死后取卵巢組織，行HE染色，觀察卵巢形態(tài);另一部分大鼠卵巢用于顆粒細胞的分離、培養(yǎng)。通過FSHR免疫細胞化學(xué)染色鑒定顆粒細胞，通過免疫組織化學(xué)、細胞化學(xué)及RT-qPCR方法檢測TGF-β和Smad4在各組卵巢及顆粒細胞中的表達變化。
　　光鏡下觀察卵巢組織形態(tài)可見各組卵巢中含有不同發(fā)育階段的卵泡以及黃體和閉鎖卵泡等結(jié)構(gòu)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示TGF-β和Smad4表達于卵巢中卵泡顆粒細胞，卵母細胞及卵泡膜細胞。與C組相比，MT組、

5、E2組卵巢中TGF-β、Smad4表達陽性率均降低(P＜0.01);與MT組相比，E2組中TGF-β、Smad4表達陽性率升高(P＜0.01)，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義。在絕經(jīng)過渡期大鼠卵巢中TGF-β和Smad4經(jīng)pearson相關(guān)系數(shù)檢驗，相關(guān)系數(shù)為0.879(P=0.000)，二者蛋白水平表達具有正相關(guān)性。RT-qPCR結(jié)果顯示，MT組和E2組大鼠卵巢及顆粒細胞內(nèi)TGF-β和Smad4mRNA的表達均低于C組(P＜0.05);且MT組大

6、鼠卵巢及顆粒細胞內(nèi)TGF-β和Smad4mRNA的表達低于雌激素E2組(P＜0.05)。通過分析實驗結(jié)果可以得出，TGF-β和Smad4廣泛表達于卵巢及其顆粒細胞，可以調(diào)節(jié)卵巢功能。在卵巢功能衰退過程中，TGF-β和Smad4表達具有正相關(guān)性，TGF-β作為Smad4上游信號分子影響著smad4的表達水平，從而影響靶基因的表達。TGF-β及Smad4在卵巢功能衰退過程中起正向調(diào)控作用。卵巢功能衰退與TGF-β及Smad4的表達下調(diào)有關(guān)。