銅綠假單胞菌對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的耐藥性及其耐藥表型與外排泵表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、目的：了解我院臨床分離的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)對(duì)8種常用抗假單胞菌藥物的耐藥性；了解外排泵抑制劑Carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone(CCCP)與Phe-Arg-β-naphthylamide(PAβN)對(duì)耐亞胺培南和美羅培南銅綠假單胞菌菌株體外敏感性的影響：探索臨床銅綠假單胞菌菌株對(duì)亞胺培南和美羅培南耐藥性差異及其與外排泵表達(dá)水平及膜孔蛋白Opr

2、D2變化之間的關(guān)系。 方法：對(duì)四川大學(xué)華西醫(yī)院2005年1月～2005年7月從臨床分離到的142株非重復(fù)Pa按NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards)推薦的瓊脂對(duì)倍稀釋法測(cè)定亞胺培南(IMP)、美羅培南(MEP)、哌拉西林／他唑巴坦、頭孢哌酮／舒巴坦、頭孢他定、氨曲南、環(huán)丙沙星及阿米卡星8種常用抗假單胞菌藥物的最低抑菌濃度(minimal inhibi

3、tory concentration，MIC)；選用對(duì)亞胺培南耐藥的107株P(guān)a進(jìn)行泵抑制劑CCCP和PApN的抑制試驗(yàn)，觀(guān)察亞胺培南和美羅培南的敏感性變化；對(duì)篩選出來(lái)的32株對(duì)亞胺培南和美羅培南不同耐藥表型的Pa，采用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法，檢測(cè)外膜蛋白OprD2相對(duì)含量，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real TimeFluorescent Quantitative PCR)法，檢測(cè)三種外排泵基因的表達(dá)量

4、，分析 不同耐藥表型的Pa耐藥機(jī)制上的差異。 結(jié)果：142株P(guān)a中主要來(lái)自ICU(31.69％)和呼吸科(11.97％)： 絕大部分為痰標(biāo)本(88.73％)。耐藥率最高的是亞胺培南(54.23％)，其 次是環(huán)丙沙星(45.07％)：敏感率最高的是哌拉西林／他唑巴坦(85.92％)． 其次為阿米卡星(81.69％)。對(duì)β內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素交叉耐藥率高達(dá)40.84 ％(58／142)，多重耐藥的菌株有38.73％(55／142

5、)。使用外排泵抑制劑 后，亞胺培南耐藥率僅有輕度下降，美羅培南耐藥率由71.96％降至65.42 ％(聯(lián)合CCCP)與63.38％(聯(lián)合PAβN)，MIC值沒(méi)有變化的菌株占 50％以上；IMP聯(lián)合PAl3N后MIC降至原MIC值1／2的菌株占11.27％、 降至原MIC值1／4的菌株占2.82％；IMP聯(lián)合CCCP后MIC降至原MIC 值1／2的菌株占41.12％、降至原MIC值1／4的菌株占4.67％；MEP聯(lián)合 PAIB

6、N后MIC降至原MIC值1／2的菌株占22.54％、降至原MIC值1／4 的菌株占1.41％；MEP聯(lián)合CCCP后MIC降至原MIC值1／2的菌株占 25.23％、降至原MIC值1／4的菌株占1.87％。提取所選32株P(guān)a的外膜 蛋白并電泳，結(jié)果顯示OprD2相對(duì)含量在耐藥組為0.00％～3.5％(其中 有一株為8.70％)，敏感組為6.20％～10.20％，統(tǒng)計(jì)顯示：碳青霉烯類(lèi)耐 藥組明顯低于敏感組。設(shè)定銅綠假單胞菌ATCC

7、27853外排泵表達(dá)量為1， 4株敏感株mexA表達(dá)量介于0.0003～0.99，mexD表達(dá)量介于0.0001～ 1.11，mexF表達(dá)量介于0.013～0.31；10株IMP耐藥、MEP敏感株mexA 表達(dá)量介于0.28～4.48，mexD表達(dá)量介于0.37～20.06，mexF表達(dá)量介 于0.44～5.56：17株IMP、MEP均耐藥株mexA表達(dá)量介于1.42～138.25， mexD表達(dá)量介于0.1～16.66，me

8、xF表達(dá)量介于0.22～12.61。在27株 碳青霉烯類(lèi)耐藥菌株中88.89％存在外排泵高表達(dá)。統(tǒng)計(jì)顯示：三種外排 泵基因表達(dá)水平在碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥組高于敏感組。 結(jié)論：銅綠假單胞菌耐藥菌株常見(jiàn)，且常呈多重耐藥和交叉耐藥。亞胺培南、美羅培南耐藥率均較高，亞胺培南耐藥率高于美羅培南，亞胺培南、美羅培南不宜作為我院治療Pa的經(jīng)驗(yàn)性選用藥物。膜孔蛋白OprD2減少或缺失是我院Pa對(duì)亞胺培南耐藥的主要原因之一，但在美羅培南耐藥中

9、所起的作用有待進(jìn)一步研究。外排泵抑制劑在Pa中對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素的抗菌活性影響較小，外排泵表達(dá)水平和泵抑制劑對(duì)：MIC影響沒(méi)有明顯的相關(guān)性。外排泵高表達(dá)是本院Pa對(duì)碳青霉烯類(lèi)抗生素耐藥的主要原因。一株菌同時(shí)存在多種外排泵高表達(dá)的現(xiàn)象十分常見(jiàn)。對(duì)亞胺培南、美羅培南均耐藥的Pa組的MexAB-OprM表達(dá)水平高于亞胺培南耐藥、美羅培南敏感組，說(shuō)明MexAB-OprM的高表達(dá)在亞胺培南、美羅培南耐藥性差異上發(fā)揮重要作用。MexCD-OprJ、