皮下及網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細胞表型轉(zhuǎn)換在NAFLD發(fā)生過程中的作用.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其它明確的損害肝臟的因素,以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合癥,包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎及其相關性肝纖維化、肝硬化,甚至肝癌,與胰島素抵抗和遺傳易感性等關系密切。最近的研究表明巨噬細胞的表型轉(zhuǎn)換可能在NAFLD中起到了重要作用,參與了NAFLD的演進。
　　巨噬細胞有兩種不同的表型狀態(tài),分別為經(jīng)典活化型即M1型,替代活化型M2型。M1型亞群巨噬細胞被

2、IFN-γ、GM-CSF、TNF所誘導,M1型亞群巨噬細胞通常被認為是正向作用的效應細胞,是一種炎癥介質(zhì)。M2型亞群巨噬細胞主要通過IL-4、IL-10、IL-13、慢性病毒感染及皮質(zhì)醇激素等誘導刺激,主要參與寄生蟲感染、免疫、炎癥下調(diào)、組織修復、凋亡小體及誘導血管再生中發(fā)揮重要作用。目前有研究認為巨噬細胞的不同表型狀態(tài)與NAFLD有著密切關系,既往研究主要關注了巨噬細胞在肝臟組織中的作用,很少關注皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織中的巨噬細胞

3、在NAFLD中的作用。
　　臨床資料及方法
　　病例選擇:
　　1.選取2012年4~10月在我院診斷的NAFLD伴單純性膽囊結石及非NAFLD伴單純性膽囊結石,且年齡為18~60歲的患者納入分析。明確為NAFLD的患者27例(NAFLD組),男10例,女17例;排除NAFLD及其他一切肝病,且肝功正常的單純性膽囊結石患者28例(非NAFLD組),男5例,女23例。
　　2.收集患者臨床資料:登記患者姓名、住院號

4、、年齡、性別、BMI、腹圍。所有納入研究患者均簽署知情同意書,醫(yī)院倫理中心備案。肝組織標本、皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織在獲得患者知情同意后通過腹腔鏡手術獲得,皮下脂肪組織從上腹部的腹壁脂肪組織獲得,網(wǎng)膜脂肪從鄰近膽囊的大網(wǎng)膜獲得。
　　3.實驗室檢測:所有研究對象均于禁食飲水12h后,于入院次日清晨抽取肘靜脈血。采用全自動生化分析儀測定如下血液學指標:血糖、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TB)、胰島素

5、、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA),并計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。
　　4.病理學診斷標準:肝組織行HE染色,皮下脂肪組織、網(wǎng)膜脂肪組織分別行HE染色及免疫組化檢測。抗CD68免疫組織化學標記巨噬細胞,抗CD11C和抗CD206分別標記M1亞群巨噬細胞及M2亞群巨噬細胞。對肝組織切片的診斷采用NAFLD活動度評分(NAS)。
　　5.ELISA檢測血清中IL-6、MCP-1的值并分析血清中IL-6與MCP-1

6、和皮下、網(wǎng)膜巨噬細胞、M1亞群巨噬細胞、M2亞群巨噬細胞的相關性。
　　6.利用SPSS19及Prism5軟件,對皮下脂肪組織、網(wǎng)膜脂肪組織的CD68、CD11C及CD206陽性細胞與肝臟脂肪變、NAS評分進行相關性分析。
　　結果
　　1.NAFLD組與非NAFLD患者比較,在年齡、腹圍、血糖、ALT、AST、TB、FFA差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);而BMI、胰島素、TG、胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR,即空腹

7、血糖×空腹胰島素/22.5)較非NAFLD組患者升高(P<0.05)。
　　2.NAFLD組與非NAFLD組比較,皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織CD68、CD11C及CD206陽性染色數(shù)量均較非NAFLD組顯著增加(P<0.05)。
　　3.兩組患者皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細胞、M1亞群巨噬細胞及M2亞群細胞巨噬細胞數(shù)量比較,NAFLD組皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織的巨噬細胞多于非NAFLD組,NAFLD組皮下脂肪組織巨噬細

8、胞數(shù)量的均值為(26.55±10.74)個,網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細胞數(shù)量的均值為(41.50±10.47)個;非NAFLD組皮下脂肪組織巨噬細胞數(shù)量的均值為(15.57±5.67)個,網(wǎng)膜脂肪組織巨噬細胞數(shù)量的均值為(29.93±11.49)個,兩組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。NAFLD組皮下脂肪組織M1亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(9.93±4.51)個,網(wǎng)膜脂肪組織M1亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(14.52±3.62)個;非NA

9、FLD組皮下脂肪組織M1亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(4.18±1.98)個,網(wǎng)膜脂肪組織M1亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(8.17±4.39)個,兩組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。NAFLD組皮下脂肪組織M2亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(15.22±6.74)個,非NAFLD組皮下脂肪組織M2亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(9.60±3.55)個,兩組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。NAFLD組網(wǎng)膜脂肪組織M2亞群巨噬細胞數(shù)量的均

10、值為(21.15±11.25)個,非NAFLD組網(wǎng)膜脂肪組織M2亞群巨噬細胞數(shù)量的均值為(19.86±8.47)個,兩組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。NAFLD組皮下脂肪組織M1/M2的均值為0.66±0.23,網(wǎng)膜脂肪組織M1/M2的均值為0.59±0.27;非NAFLD組皮下脂肪組織M1/M2的均值為0.45±0.16,網(wǎng)膜脂肪組織M1/M2的均值為0.42±0.20,兩組比較差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　

11、　4.在NAFLD組中M1亞群巨噬細胞、M2亞群巨噬細胞的數(shù)量與NAS評分的相關性,對NAFLD患者的肝臟損害進行NAS評分,27例NAFLD患者中,1例為7分,4例為6分,7例為5分,3例為4分,7例為3分,4例為2分,1例為1分。在NAFLD患者的皮下脂肪組織中CD68陽性細胞、CD11C陽性細胞及CD206陽性細胞與NAS評分呈正相關(r=0.496,r=0.589,r=0.657,P<0.01)。NAFLD患者的網(wǎng)膜脂肪組織中,

12、CD68陽性細胞及CD11C陽性細胞與NAS評分呈正相關(r=0.426,P<0.05;r=0.465,P<0.01),CD206與NAS評分無明顯相關(r=0.32,P>0.05)。但皮下及網(wǎng)膜脂肪組織的CD11C/CD206陽性細胞與NAS評分無明顯相關(r=0.242,r=0.168,P>0.05)。
　　5.NAFLD組與非NAFLD組比較,NAFLD組IL-6的水平高于非NAFLD組,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),

13、非NAFLD組MCP-1高于NAFLD組,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在NAFLD組血清IL-6與皮下及網(wǎng)膜脂肪組織中巨噬細胞、M1亞群巨噬細胞及M2亞群巨噬細胞無明顯相關(r=0.082,r=-0.158,r=-0.010,r=0.212,r=0.019,r=0.277,P>0.05);血清MCP-1與皮下及網(wǎng)膜脂肪組織中巨噬細胞、M1亞群巨噬細胞及M2亞群巨噬細胞無明顯相關(r=0.006,r=0.084,r=0.007,r=

14、-0.189,r=-0.059,r=-0.179,P>0.05)。血清中IL-6及MCP-1與NAS評分無明顯相關(r=-0.166,r=0.077,P>0.05)。
　　結論
　　1.NAFLD患者的BMI、胰島素、TG、胰島素抵抗指數(shù)較非NAFLD組顯著升高,提示NAFLD患者與胰島素抵抗密切相關。
　　2.在NAFLD患者的皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織的巨噬細胞數(shù)量、M1亞群巨噬細胞數(shù)量、M2亞群巨噬細胞的數(shù)量及M

15、1/M2都同時增加,以M1亞群巨噬細胞增加更為明顯,說明皮下脂肪組織及網(wǎng)膜脂肪組織中的巨噬細胞表型轉(zhuǎn)換可能參與了NAFLD的疾病進展。
　　3.NAFLD患者無論皮下脂肪還是網(wǎng)膜脂肪的巨噬細胞都與肝臟脂肪變、炎癥、纖維化密切相關,因皮下脂肪更易取得,臨床上可否將皮下脂肪的巨噬細胞及各亞型數(shù)量作為預測NAFLD嚴重程度的指標需進一步研究。
　　4.血清中巨噬細胞相關的炎癥因子IL-6及MCP-1不能很好的反映NAFLD患者肝臟