黃芪多糖對(duì)脂肪組織中巨噬細(xì)胞活化的影響機(jī)制.pdf

1、背景：胰島素抵抗(insulin resistance IR)是多種疾病的共同發(fā)病機(jī)制，也是一種炎癥狀態(tài)。脂肪組織中巨噬細(xì)胞(adipokse tissue macrophages ATMs)在IR中有重要作用。近年研究顯示，黃芪多糖（astragalus polysaccharide APS）能改善IR，但其機(jī)制尚不完全明確。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)APS在改善IR的同時(shí)，能減少ATMs的數(shù)量。而且ATMs數(shù)量的減少將減輕脂肪組織低度炎癥的

2、程度、減少致炎性脂肪細(xì)胞因子的產(chǎn)生、改善IR。ATMs已經(jīng)成為治療IR的新靶點(diǎn)。通過(guò)查閱文獻(xiàn)，尚未見(jiàn)有APS對(duì)ATMs影響的相關(guān)報(bào)道。那么APS減少ATMs的作用是通過(guò)影響脂肪細(xì)胞？還是直接作用于巨噬細(xì)胞？以及通過(guò)何種機(jī)制減少了ATMs?這些問(wèn)題尚不明確，需進(jìn)一步探索。
　　目的：探討APS對(duì)ATMs的影響機(jī)制。明確APS的作用位點(diǎn)是通過(guò)影響脂肪細(xì)胞，還是直接作用于巨噬細(xì)胞;通過(guò)觀察致炎因子的表達(dá)來(lái)探討APS的干預(yù)對(duì)巨噬細(xì)胞活化的

3、影響。
　　方法：(1)細(xì)胞培養(yǎng):脂肪細(xì)胞采用3T3-L1細(xì)胞株，巨噬細(xì)胞采用ANA-1細(xì)胞株。將3T3-L1前體脂肪細(xì)胞接種于培養(yǎng)板內(nèi)，用含10％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)在37℃、5％CO2培養(yǎng);待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)至80-90％，融合2天后，加含終濃度0.5mmol/L IBMX、1umol/LDEX和終濃度為10ug/ml的胰島素的10％小牛血清高糖DMEM培養(yǎng)48h;48h后換含終濃度為10ug/ml的胰島素的10％小牛血清高糖D

4、MEM再培養(yǎng)48h;48h后再換含10％小牛血清的高糖DMEM繼續(xù)培養(yǎng);以后每2天更換含10％小牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液一次。誘導(dǎo)分化8至12天，90％的3T3-L1細(xì)胞呈成熟脂肪細(xì)胞，用油紅O鑒定后用于實(shí)驗(yàn)。
　　(2)本研究采用對(duì)照設(shè)計(jì)。實(shí)驗(yàn)分三組:空白對(duì)照組(NC)，APS干預(yù)脂肪細(xì)胞組(AF)，APS干預(yù)巨噬細(xì)胞組(AM)，每組培養(yǎng)8個(gè)復(fù)孔。將成熟脂肪細(xì)胞低于90％者剔除出組，最后每組選擇6個(gè)復(fù)孔做對(duì)照試驗(yàn)。通過(guò)Tran

5、swell共培養(yǎng)方式，將巨噬細(xì)胞種于上室內(nèi)，將脂肪細(xì)胞種在下室內(nèi)，采用孔徑0.4um的膜。脂肪細(xì)胞3T3-L1分化成熟后，將0.100g/L的APS分別加入脂肪細(xì)胞培養(yǎng)液和巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液作為干預(yù)因素，對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)液不加APS;48小時(shí)后取出小室，去除培養(yǎng)液，加入細(xì)胞裂解液，收集細(xì)胞裂解液后采用半定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOS)的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)采用酶聯(lián)免疫試劑法(ELISA)檢測(cè)各組上下小室培養(yǎng)液中

6、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS13.0軟件進(jìn)行，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示實(shí)驗(yàn)結(jié)果。采用t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水平采用0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：(1)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示:①I(mǎi)L-6: AF組下室與NC組下室比較，p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AF組上室與NC組上室、AM組上室與NC組上室、AM組下室與NC組下室比較，p＞0.05，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義。②TNF-α: AF組下室與NC組下室比較，p＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AF組上室與NC組上室、AM組上室與NC組上室、AM組下室與NC組下室比較，p＞0.05，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:NC組上室iNOS出現(xiàn)高表達(dá)，AF組上室與AM組上室iNOS表達(dá)量均降低，但AF組上室表達(dá)量更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.APS減少ATMs的作用位點(diǎn)是脂肪細(xì)胞。