子癇前期與MTHFR基因多態(tài)性及同型半胱氨酸水平關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)代謝關(guān)鍵酶-N<,5>，N<,10>亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)C677T及A1298C基因多態(tài)性與子癇前期病因的相關(guān)性；比較子癇前期患者血漿同型半胱氨酸、葉酸(folic acid，F(xiàn)A)、維生素B<,12>(vitamin B<,12>，VitB<,12>)水平與正常足月妊娠孕婦之間的差異：探討子癇

2、前期發(fā)病的遺傳學(xué)機制及營養(yǎng)飲食因素在子癇前期發(fā)病中的作用。 方法：子癇前期組50例(包括14例輕度子癇前期患者，36例重度子癇前期患者)，診斷標準依據(jù)全國高等學(xué)校教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第6版，對照組40例，為年齡及孕周與研究組皆相匹配的正常足月妊娠孕婦。兩組孕婦既往均無高血壓、心臟病、腎病、糖尿病及肝病病史，無輸血及免疫治療史。分別采集兩組孕婦空腹肘靜脈血5ml離心，取上層血清4ml，-80℃保存待測同型半胱氨酸、葉酸及維生素B<,1

3、2>濃度，下層沉淀(內(nèi)含血細胞)留待提取DNA。 ①采用多聚酶鏈反應(yīng)一限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)，MTHFR基因677 PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)Hinf Ⅰ酶切，MTHFR基因1298 PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)Mbo Ⅱ酶切，酶切產(chǎn)物用8﹪聚丙烯酰胺凝膠電泳成像系統(tǒng)成像后，根據(jù)酶切圖判斷基因型，分析兩組MTHFR基因677及1298位點基因多態(tài)性及等位基因頻率。 ②采用熒光偏振免疫分析法(FPIA)檢測兩組孕婦血漿中H

4、cy濃度，并同時用微粒子酶聯(lián)免疫分析法(MEIA)檢測兩組孕婦血漿中葉酸、維生素B<,12>水平。 ③采用SPSS for Windows 10.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，各組MTHFR基因型分布及等位基因頻率比較均采用x<'2>檢驗。計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，血漿Hcy組間比較采用t檢驗。結(jié)果：①MTHFR基因677 PCR擴增產(chǎn)物僅見一條198bp電泳條帶，經(jīng)Hinf I酶切后，CC型純合子仍為一條198b

5、p電泳條帶，TT型純合突變子為兩條帶，分別為175bp和23bp，而CT型雜合突變子見三條帶，分別為198bp、175bp和23bp。子癇前期組中MTHFR基因677位點TT型(純合突變型)7例，占14.0﹪，TC型(雜合突變型)21例，占42.0﹪：對照組TT型3例，占7.5﹪，TC型8例，占20.0﹪，子癇前期組MTHFR基因677位點CT、TT基因型顯著高于對照組(P<0.05)，總的突變T等位基因頻率顯著高于對照組(P<0.05

6、)。 ②MTHFR基因1298 PCR擴增產(chǎn)物僅見一條163bp電泳條帶，經(jīng)Mbo II酶切后，含1298AA的PCR．產(chǎn)物有4個酶切位點，產(chǎn)生56、31、30、28和18bp五條電泳條帶，CC型純合突變子因失去一個酶切位點，產(chǎn)生84、31、30和18bp四條帶，而AC型雜合突變子產(chǎn)生84、56、31、30、28和18bp 六條電泳條帶。子癇前期組中MTHFR基因1298 CC型(純合突變型)3例，占6.0﹪，AC型(雜合突變型

7、)18例，占36.0﹪；對照組CC型(純合突變型)2例，占5.0﹪，AC型(雜合突變型)14例，占35.0﹪，子癇前期組中MTHFR基因1298位點的三種基因型：AA、AC、CC頻率分布與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)；總的突變C等位基因頻率兩組中亦無顯著性差異(P>0.05)。 ③子癇前期組Hcy水平為12.00±4.59μmol/l，對照組Hcy水平為7.85±1.51μmol/l，子癇前期組Hey水平顯著高于對照組

8、(P<0.01)，其中子癇前期重度患者(36例)Hey水平為13.30±2.06μml/l，子癇前期輕度患者(14例)Hcy水平為8.63±3.94μmol/l，重度子癇前期患者血漿中Hey含量明顯高于對照組，差異有顯著性(P<0.01)，輕度子癇前期患者血漿中Hey濃度高于對照組，但差異無顯著性(P>0.05)。 ④子癇前期組葉酸濃度7.904±1.70nmol/l，對照組為15.324±2.86nmol/l，子癇前期組血漿中

9、葉酸水平較對照組顯著降低(P<0.001)；子癇前期組血漿維生素B<,12>水平為176.54±1.11pmol/l，對照組為188.82±1.01 pmol/l，子癇前期組較對照組略高，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 ⑤子癇前期組血漿中葉酸水平和Hey濃度呈負相關(guān)(r=-0.550，P<0.001)，對照組血漿中葉酸水平和Hey濃度亦呈負相關(guān)(r=-0.582，P<0.05)；子癇前期組血漿中維生素B<,12>水平和He