活化血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-1誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 比較表達(dá)VEGFR-1的乳腺癌細(xì)胞株MCF-7經(jīng)VEGFR-1的特異性配體VEGF-B活化前后E-cadherin，Vimentin和Snail的mRNA和蛋白表達(dá)的改變。從分子和蛋白水平探討MCF-7的受體VEGFR-1的活化與乳腺癌細(xì)胞株MCF-7發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的關(guān)系。為以VEGFR-1為靶點(diǎn)治療該疾病提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)VEGFR-1陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞株MC

2、F-7，MTT法找到VEGFR-1的特異性配體VEGF-B促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞株MCF-7生長(zhǎng)的最適濃度；在此濃度下活化MCF-7細(xì)胞的VEGFR-1受體；實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western-blot方法檢測(cè)MCF-7細(xì)胞VEGFR-1活化前后E-cadherin，Snail和Vimentin的mRNA和蛋白表達(dá)的改變。
　　 結(jié)果：
　　 Western-blot方法，MCF-7細(xì)胞VEGFR-1活化后E-cadher

3、in，Vimentin和Snail蛋白表達(dá)分別為0.399±0.02、0.919±0.17、0.460±0.012;活化前分別為0.824±0.41、0.207±0.067、0.134±0.054。E-鈣粘蛋白在活化后表達(dá)下降，Vimentin和Snail蛋白在活化后表達(dá)明顯增高(P＜0.05)。熒光定量RT-PCR檢測(cè)E-cadherin、Vimentin、Snail基因在活化后的平均Ct值分別為29.45、12.45、15.205，

4、活化前的平均Ct值分別為12.785、25.55、20.55。2-ΔΔCt結(jié)果顯示活化后E-cadherin、Vimentin、Snail基因的拷貝數(shù)與活化前的拷貝數(shù)比值分別為0.1811、103.97、40.645?；罨昂驟-cadherin、Vimentin、Snail基因表達(dá)的ΔCt值進(jìn)行比較，活化后△Ct值分別為7.1±0.10、-9.9±0.05、-7.145±0.005，活化前△Ct值分別為：-9.565±0.02、3.2