二氯化鈷對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖及腫瘤血管生成因子的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用二氯化鈷（Cobalt Chloride,CoC12）在體外構(gòu)建細(xì)胞低氧模型，探討二氯化鈷對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖及腫瘤血管生成因子的影響。
　　方法：
　　1.應(yīng)用二氯化鈷作為化學(xué)性低氧誘導(dǎo)劑，體外構(gòu)建乳腺癌MCF-7細(xì)胞低氧模型；
　　2. MTT法檢測二氯化鈷對體外培養(yǎng)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用；
　　3.倒置相差顯微鏡觀察低氧模型中人乳腺癌MCF-7細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；
　　4

2、. RT-PCR法檢測體外低氧模型中培養(yǎng)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞中低氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）、趨化因子受體（CXCR4）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在mRNA水平表達(dá)變化的影響；
　　5.Western blot分析體外低氧模型中培養(yǎng)的人乳腺癌MCF-7細(xì)胞HIF-1α、CXCR4和VEGF在蛋白水平的表達(dá)變化的影響。
　　結(jié)果：
　　1.倒置相差顯微鏡觀察顯示：CoC12（50、100、150、200μmol/L

3、）在不同的時間段（12 h、24 h、48 h）作用MCF-7細(xì)胞。與對照組相比，經(jīng)CoCl2處理的低氧模型中細(xì)胞隨藥物濃度的增加出現(xiàn)不同程度的形態(tài)學(xué)變化，如胞體收縮、胞膜出泡、細(xì)胞破碎等，上述變化呈時間-劑量依賴關(guān)系；
　　2. MTT法檢測發(fā)現(xiàn)：CoC12對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖有一定的抑制作用，上述不同濃度的CoC12在不同的時間段（12 h、24 h、48 h）對MCF-7細(xì)胞有生長抑制效應(yīng)，呈劑量和時間依賴性（P<0.

4、05），其中CoC12作用24 h，抑制率分別（54.62±0.07）％、（65.21±0.03）%、（80.15±0.01）%、（94.51±0.01）%，IC50值143.28μmol/L；
　　3.RT-PCR檢測結(jié)果：CoC12（50、100、150、200μmol/L）作用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞24h，對HIF-1α mRNA的表達(dá)影響較??；但CXCR4 mRNA表達(dá)隨CoC12濃度增加而上調(diào)，與空白對照組相比較，差異有

5、統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），平均相對灰度值分別為0.710±0.130、0.830±0.140、0.920±0.170、0.810±0.120、0.650±0.220；VEGF mRNA表達(dá)與空白對照組相比較，差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），平均相對灰度值分別為0.490±0.110、0.630±0.140、0.800±0.090、0.430±0.140、0.55±0.060；
　　4.Western blot結(jié)果顯示：CoC

6、12（50、100、150、200μmol/L）作用于人乳腺癌MCF-7細(xì)胞株24 h，HIF-1α蛋白表達(dá)增高（P<0.05），平均相對灰度值分別為1.000±0.061、2.730±0.150、4.810±0.420、8.170±0.520、6.890±0.380；CXCR4蛋白表達(dá)增高，與空白對照組相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），平均相對灰度值分別為1.000±0.120、1.750±0.180、2.770±0.620、

7、7.120±0.340、5.120±0.180；VEGF蛋白表達(dá)與空白對照組相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），平均相對灰度值分別為1.000±0.010、1.450±0.071、2.670±0.170、5.350±0.150、5.650±0.150。
　　結(jié)論：
　　1.二氯化鈷可抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖，且伴隨細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，其效應(yīng)呈時間和濃度依賴性。
　　2.二氯化鈷可誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞HIF